病的治疗,因此这类技术成为现代分子生物学的研究热点。
技术介绍:
目前,来自 Streptococcus pyogenes 的 CRISPR-Cas9 系统应用最为广泛。Cas9 蛋白(含有两个核酸酶结构域,可以分别切割 DNA 两条单链。Cas9 首先与 crRNA 及 tracrRNA DNA,形成 RNA-DNA 复合结构,进而对目的DNA 使 双链断裂。由于 PAM
通过基因工程手段对 crRNA 和 tracrRNA 进行改造,将其连接在一起得到 sgRNA (single guide RNA) 。融合的 RNA 具有与野生型 RNA 类似的活力,但因为结构得到了简化更方便研究者使用。 通过将表达 sgRNA 的原件与表达 Cas9 的原件相连接,得到可以同时表达两者的质粒,将其转染细胞,便能够对目的基因进行操作。
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