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(完整word版)生物化学实验知识点整理,推荐文档

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生物化学实验知识点整理

实验一 还原糖的测定、实验二 粮食中总糖含量的测定

1.还原糖测定的原理

3,5-二硝基水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成棕色的氨基化合物,在550nm处测定光的吸收增加量,得出该溶液的浓度,从而计算得到还原糖的含量 2.总糖测定原理 多糖为非还原糖,可用酸将多糖和寡糖水解成具有还原性的单糖,在利用还原糖的性质进行测定,这样就可以分别求出总糖和还原糖的含量 3.电子天平使用

4.冷凝回流的作用:

使HCl冷凝回流至锥形瓶中,防止HCl挥发,从而降低HCl的浓度。 5.多糖水解方法: 加酸进行水解

6.怎样检验淀粉都已经水解:

加入1-2滴碘液,如果立即变蓝则说明没有完全水解,反之,则说明已经完全水解。

7.各支试管中溶液的浓度计算 8.NaOH用量:nNaOH?nHCl

9.不能中途换分光光度计,因为不同的分光光度计的光源发光强度不同

10.分光光度计的原理:在通常情况下,原子处于基态,当通过基态原子的某辐射线所具

有的能量(或频率)恰好符合该原子从基态跃迁到激发态所需的能量(或频率)时,该基态原子就会从入射辐射中吸收能量,产生原子吸收光谱。原子的能级是量子化的,所以原子对不同频率辐射的吸收也是有选择的。这种选择吸收的定量关系服从式?E?h??hc/?。 实验证明,在一定浓度范围内,物质的吸光度A与吸光样品的浓度c及厚度L的乘积成正比,这就是光的吸收定律,也称为郎伯-比尔定律

分光光度计就是以郎伯比尔定律为原理,来测定浓度

11.为什么要水解多糖才能用DNS

因为DNS只能与还原糖溶液在加热的条件下反应生成棕红色的氨基化合物,不能与没有还原性的多糖反应。 12.为什么要乘以0.9

-6H10O5)n-+n H2O因为淀粉的水解方程式为-(C以0.9才能得到多糖的含量。

nC6H12O6,只有用还原糖的含量乘13.为什么要中和后再测?

因为DNS要在中性或微碱性的环境下与葡萄糖反应

实验三 蛋白质的水解和纸色谱法分离氨基酸、实验四 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度

1.纸色谱分离氨基酸分离原理

由于各氨基酸在固定相(水)和流动相(有机溶剂)中的分配系数不同,从而移动速度不同,经过一段时间后,不同的氨基酸将存在于不同的部位,达到分离的目的。

2.天然氨基酸为L型

3.酸式水解的优点是:是保持氨基酸的旋光性不变,原来是L型,水解后还是L型,由于甘氨酸所有的R基团是氢原子,所以它不是L型

5.酵母粉水解后绝对不含有色氨酸

6.根据分离原理不同分离色谱可分为:有吸附色谱、离子交换色谱、分配色谱等 7.不同物质的Rf值不同,同种物质不同条件的Rf值不同

吹分时不能吹的过热和过干,与滤纸结合太紧密。流动相带走不是很容易。容易出现拖尾

8.喷完茚三酮后不能直接放入烘箱,先自然晾干再放入烘箱内,茚三酮乙醇高温易着火,烘箱的金属条过热也会显色。会出现拖尾或斑点状,样品显色后成条状,;酵母分解后不知有5个斑点,会有很多种,两种之间可能还有其它的氨基酸, 9.茚三酮的反应方程式

10.考马斯亮蓝测定蛋白质浓度 :范德瓦尔键通过分子间静电吸引力结合 11.考马斯亮蓝分为G-250(反应速度快,不易洗脱,用定量测定)、R-250反应速度慢,易洗脱,通常用于定性测定

12.考G-250与蛋白质结合后稳定时间为1h左右 13.蛋白质的盐析反应

蛋白质中加入某些饱和盐,蛋白质溶液中浓度下降,蛋白质析出 14.蛋清:NaCl溶液=1:9 10%卵清蛋白

实验五 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳、实验六 维生素C的定量测定 1.醋酸纤维薄膜电泳的原理、影响迁移的因素

血清中各种蛋白质离子在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动。由于各种蛋白质的等电点不同,从而在同一pH环境中所带电荷量有所不同,同时分子大小形状各有差异,所以在统一电场中泳动速度不同。一般来说,所带的电荷多且颗粒小的,泳动速度快,反之则慢。 2.影响电泳的因素:

(1)粒子本身 (电荷量、粒子大小、形状) (2)黏度 (3)电场 (4)电渗

(5)支持物的筛口 3.醋酸纤维薄膜的优点

具有均一的泡沫样结构,厚度仅120微米,有强渗透性,对分子移动无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白质电泳有简便、快速、样品用量少,应用范围广,分离清晰,没有吸附现象等优点。 4.pH8.6中带负电,往阳极移动

5.五条带的顺序:血清蛋白、?1球蛋白、?2球蛋白、?球蛋白、?球蛋白 6.层析时,粗糙面朝上,电泳时粗糙面朝下,记号做在光泽面 7.实验成败的关键P43-P45

8测定VC的原理:还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料,本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中,2,6-二氯酚靛酚呈红色,还原后变为无色。因此,当染料滴定含有维生素C的酸性溶液时,维生素C尚未全部被氧化前,则滴下的染料立即变成无色。一旦溶液中的维生素C全部被氧化,则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。 9.1%草酸有何作用

(1)提供一个显色环境

(2)保护维生素C (3)作空白对照

实验七 蛋白质总氮含量的测定、实验八 正交法测定几种因素对酶活性的影响 1.凯氏定氮法的原理:

含氮有机化合物在浓硫酸中消化生成硫酸铵,再在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液使硫酸铵分解放出氨气。用水蒸气蒸馏法将氨蒸入过量标准无机酸溶液中,然后用标准酸溶液进行滴定,准确测定按量,从而计算出含氮量。 2.用此方法通常会高于实际含量?

3.H3BO3指示剂在pH<5.4时为紫红,pH>5.4时为绿色 4.CuSO4催化反应

K2SO4与NaSO4提高反应沸点

5.凯氏定氮法的优点:可以测定固液试样 6.怎样检测蒸馏器已洗净(P53)

7.为什么小漏斗内要作保留一点30%NaOH

NaOH加进后会立即反应放出氨气,主要作水封 8.正交法实验原理

利用正交表来安排多因素实验的方法。它是由试验因素的全部水平组合中,挑选部分有代表性的水平组合进行试验,通过对这部分试验的结果的分析,了解全部实验的情况,找出最优组合。 特点:

用部分试验代替全部试验,通过部分试验结果分析,了解全部实验的情况

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