药物分析

三、鉴别试验的条件 溶液的浓度 溶液的温度 溶液的酸碱度 试验时间 干扰成分的存在

四、鉴别试验的灵敏度 1．反应灵敏度和空白试验 在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度。常用最低检出量和最低检出浓度表示。

空白试验是指在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。

2．提高反应灵敏度的方法 （1）加入与水不互溶的有机溶剂提取浓集

（2）改变观测方法：目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度法。

第三章 药物的杂质检查

[重点、难点、要点、基本概念] 一、杂质和杂质限量检查 (一)药物的纯度

1．药物纯度的概念：药物的纯度是指药物的纯洁程度。 2．药物纯度的评价：应把药物的形状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。 （二）药物中杂质的来源 1．杂质的概念 药物中存在的无治疗作用，影响药物的疗效和稳定性，甚至对人体健康有害的物质，称为药物的杂质。 2．杂质的来源 一是在生产过程中引入 主要有两个方面：

二是在贮藏过程中引入 3．杂质的分类 按杂质的来源分为一般杂质和特殊杂质；按性质可分为信号杂质和有害杂质。一般杂质是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐等。特殊杂质是指在个别药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如阿斯匹林中的游离水杨酸，肾上腺素中的肾上腺酮。药物中的杂质按其性质还可以分为信号杂质和有害杂质。信号杂质一般无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平，氯化物、硫酸盐等就属于信号杂质。有害杂质，如重金属、砷盐、氰化物等，对人体有害，在药品标准中必须严格控制。

（三）杂质的限量检查 1．杂质限量的概念 药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。 2．杂质限量的计算 杂质限量的计算公式：

杂质限量 = 杂质的最大允许量÷供试品的量×100% L = C×V/S×100% 例1．对乙酰基酚中的氯化物的检查：

已知：S = 2.0g×25/100；C = 10μg/ml；V = 5.0ml 求： L = ？

解：L = C×V/S×100% =

10×5.0/2.0×10-6×25/100×100% = 0.01%

二、一般杂质的检查方法 （一）氯化物的检查

1．原理 是利用氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液作用，生

成氯化银的白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，以判断供试品中氯化物是否超过限量。

Cl- + Ag+ AgCl 2．条件：[Cl-] 0.05mg～0.08mg/50ml, 即相当于标准氯化钠溶液

5ml～8ml。 酸度 稀硝酸10ml/50ml。

温度 30～40℃ 3．干扰的排除

（1）供试品液混浊：可用含硝酸的蒸馏水洗净氯纸中氯化物后过滤来消除混浊对氯化物检查的干扰。

(2）供试品有色：可采用内消色法，按中国药典附录规定的方法处理。即取两份供试品溶液，于其中一份中先加入硝酸银试液1.0ml，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复过滤，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试溶液，将两液在暗处放置5min后比较，即可消除颜色的干扰。

（二）硫酸盐检查法

1．原理 是利用SO42-在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作用，生成硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的硫酸钡浑浊液比较，以判断供试品中硫酸盐是否超过限量。

2．条件：[SO42-] 0.1mg～

0.5mg/50ml, 即相当于标准硫酸钾溶液

1～5ml。 酸度 稀盐酸2ml/50ml。 3．干扰的排除

供试品有色：可采用内消色法。 （三）铁盐检查法

1．原理 是利用Fe3+在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵试液作用，生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后所显的颜色进行比较，以判断供试品中铁盐是否超过限量。

2．条件：[Fe3+] 0.01mg～0.05mg/50ml, 即相当于标准硫酸钾溶液

1～5ml。 酸度 稀盐酸4ml/50ml。 3．干扰的排除

（1） 当有Fe2+存在时，可加入氧化剂过硫酸铵氧化供试品中的Fe2+成Fe3+。

（2）当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。 （四）重金属检查法

重金属是指在实验室条件下与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、酮、镉、锡、锑、铋等，由于药品生产过程中遇到铅的机会比较多，铅在体内友易积蓄中毒，故检查时以铅作为代表。 中国药典（2000年版）重金属的检查法一共收载了四种方法： 第一法为硫代乙酰胺法；第二法是将供试品在500~600℃在500炽灼破坏后，再按第一法检查；第三法是检查能溶入碱溶液，而不溶于酸溶液的药物，在

碱性条件下用硫化钠作显色剂；第四法为微孔滤膜法，通过微孔滤膜过滤，使试验条件下生成的硫化铅沉淀富集于滤膜上，形成铅斑，比较供试溶液和对照溶液铅斑的颜色，来判断供试品种的重金属是否超过限量。以下重点讨论第一法。

1．原理 是利用硫代乙酰胺在弱酸性溶液中与硫氰酸铵试液作用，生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后所显的颜色进行比较，以判断供试品中铁盐是否超过限量。

2．条件：[Fe3+] 0.01mg～0.05mg/50ml, 即相当于标准铅溶液 1～2ml。

酸度 稀盐酸4ml/50ml。 3．干扰的排除

(1) 供试品有色：可采用外消色法消除干扰。

(2) 供试品有微量Fe3+：在弱酸性溶液中氧化硫化氢析出硫，产生混浊影响

比色，可加Vc或盐酸羟胺使Fe3+氧化成Fe2+离子再检查。 （五）砷盐检查法

《中国药典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC）检查药物中的微量的砷盐。 1. 古蔡法

(1) 原理：是利用锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应，生成具有挥发性的砷化氢，与溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液在相同条件下所生成的砷斑比较，以判断供试品中砷盐是否超过限量。

(2) 试剂的作用：碘化钾和氯化

亚锡的主要作用是将五价的砷还原成三价的砷；醋酸铅棉的作用是消除供试品可能含有的少量的硫化物。 2. Ag-DDC法

(1) 原理：是利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的银还原为红色胶态银，以Ag-DDC溶液为空白，于510nm的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得大于标准砷溶液的吸收度。 (2) 试剂的作用：同古蔡法。 （六）溶液颜色检查法 溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量的方法。中国药典（2000年版）收载有三种方法： 1. 标准比色液进行比较的方法 2. 分光光度法 3. 色差计法

（七）易炭化物检查法 易炭化物检查法是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。常采用与标准比色液比色的方法进行检查。 （八）澄清度检查法

澄清度检查法是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与浊度标准液比浊的方法进行检查。 （九）炽灼残渣检查法 炽灼残渣检查法是检查有机药物中混入的各种无机杂质。常采用重量方法进行检查。 （十）干燥失重检查法 干燥失重检查法主要检查药物中的水分及其他挥发性的物质。常采用重量方法进行检查。常用的方法有三种： 压恒温干燥法 燥剂干燥法 压干燥法

（十一）有机溶剂残留量测定法 有机溶剂残留量测定法主要检查药物在生产过程中引入的有

害的有机溶剂。

常采用气相色谱法方法进行检查。常用的方法有二种： 接进样法 空进样法

三、特殊杂质的检查方法 （一）利用药物和杂质在物理性质上的差异

臭味及挥发性的差异

例如黄凡士林中异性有机物检查：去本品2g，直火加热应无辛臭。

再例如浓过氧化氢中不挥发性杂质的检查：取本品10ml，水浴蒸干，在105℃干燥至恒重，残渣小于15mg。 颜色的差异

例如磺胺嘧啶中有色杂质的检查：取本品2.0g,加氢氧化钠试液10ml溶解后，溶液应澄清无色，若显色与黄色3号比色液比较，不得更深。 溶解行为的差异

例如吡哌酸检中不溶物的检查：双吡哌酸甲酯（Ⅰ）和吡哌酸甲酯（Ⅱ）均不溶于氢氧化钠试液。因此可通过溶液的澄清读来控制这些杂质。 选光性的差异

例如硫酸阿托品中莨菪碱的检查：共识水溶液（50mg/ml）的选光度小雨-0.4℃。 对光吸收性质的差异

（1）紫外分光光度法：①在一定的波长杂质有吸收，而药物无吸收；②杂质杂质紫外吸收光谱与药物紫外吸收光谱重叠；③药物在紫外区有明显吸收，而杂质吸收很弱货物吸收。

（2）原子吸收分光光度法：主要用于药物中金属盐等杂质的检查，如曾用于维生素C、硫酸庆大霉素和安痛定注射液中Na、K、Ca、Mg含量测定。

（3）红外分光光度法：主要用于药物中无效和低效晶型的检查，如甲苯米唑中A晶型的检查。

（4）荧光分析法：例如利血平中氧化产物的检查，是根据利血平纯品无荧光，其氧化产物有荧光。

吸附或分配性质的差异 （1）TLC法：①杂质对照法；②高低浓度对照法。

（2）PC法：主要用于极性大的药物的杂质检查，如地高辛、盐酸苯乙双胍中有关杂质的检查。 （3）HPLC法：①分面积归一化法；②不加校正因子的主成分自身对照法；③加校正因子的主成分自身对照法；④内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量；⑤外标法测定供试品中某个杂质或主成分的含量。 （4）GC法：同HPLC法。 （二）利用药物和杂质在化学性质上的差异

1．酸碱性的差异：①规定消耗滴定液的体积；②pH值测定法；③指示剂法。

2．氧化还原性质的差异：利用药物与杂质氧化还原电位的差异进行检查，如氯化物中碘化物或溴化物的检查。

3．杂质与一定的试剂反应产生沉淀：如生物碱中其他生物碱的检查，多采用此法。

4．杂质与一定的试剂反应产生颜色：利用药物重的杂质与某些试剂发生氧化化、络合、偶合等显色反应，进行药物中杂质的鉴别。

5．杂质与一定的试剂反应产生气体：利用此法可检查药物中的砷、硫、碳酸盐、氨盐、氰化物等。例如氰化物的检查中国药典采用：①改进普鲁士蓝法；②气

体扩散-三硝基苯酚法。 6．药物经有机破坏后检查杂质：①硒的检查；②氟的检查。 二、练习题 [A型题]

1．含锑药物的砷盐检查方法为 A.古蔡法 B.碘量法 C.白田道夫法 D.Ag-DDC E.契列夫法

2．药物中杂质的限量是指 A.杂质是否存在 B.杂质的合适含量 C.杂质的最低量 D.杂质检查量 E.杂质的最大允许量

3．中国药典中收载的砷盐检查方法为

A.摩尔法 B.碘量法 C.白田道夫法 D.Ag-DDC E.契列夫法 [B型题]

A. 稀HNO3 B.硫代乙酰胺试液 C. BaCl2试液 D. Ag-DDC试液 E. NH4SCN试液 1. 铁盐检查 2. 硫酸盐检查 3. 氯化物检查 4. 砷盐检查

A. AgNO3试液 B.硫代乙酰胺试液 C. BaCl2试液 D. KI-SnCl2试液 E. NH4SCN试液 5. 重金属检查 6. 硫酸盐检查 7. 氯化物检查 8. 砷盐检查 [X型题]

1．一般杂质检查包括 A. 氯化物检查 B. 硫酸盐检查 C. 重金属检查

D. 砷盐检查 E. 铁盐检查

2．干燥失重检查法有： A. 压恒温干燥法 B. 燥剂干燥法 C. 减压干燥法 D. 摩尔法 E. 白田道夫法 二、答案精讲 [A型题]

1．C 因为含锑药物的砷盐检查方法为白田道夫法，因为锑可被还原成锑化氢，可与溴化汞试纸生成题斑，干扰砷斑的检查，不能用古蔡法检查。 2. E 3. D [B型题]

1.E 2.C 3.A 4.D 5.B 6.C 7.A 8.D 因为AsO43-还原成AsH3比较慢, KI-SnCl2试液可将AsO43-还原成AsO33-, 然后再还原成AsH3。 [X型题]

1.A B C D E

2.A B C 因为干燥失重检查方法只有三种，即只能选A，B，C。