烯效唑(S3307)浸种对小麦种子成苗与生长的影响

植物生理学综合实验报告

题 目：烯效唑（S3307）浸种对小麦种子成苗与生长的影响

专业年级：

姓 名：

学 号：

指导教师：

期：2013年12月22日 日

烯效唑（S3307）浸种对小麦种子成苗与生长的影响

摘要：1、目的：分别对小麦种子（川育20）施以CK、10、20、40mg/L的烯效唑（S3307）浸种处理，通过不同浓度S3307浸种研究S3307对小麦种子幼苗形态指标和生理指标的影响。2、方法：TTC法[1]、分光光度法[2]、酸性茚三酮法[3]等测定小麦幼苗根系活力、小麦幼苗叶绿素含量、游离脯氨酸含量、丙二醛含量[4]；3、结果：烯效唑可抑制小麦地上部分的生长、促进地下部分伸长、抑制生根数、增大根冠比、提高根系活力、增加叶绿素和游离脯氨酸含量，减少丙二醛含量。4、结论：用浓度为10mg/L的S3307处理小麦种子对小麦种子的成苗与发育效果最好。

关键词：烯效唑 形态指标 生理指标 小麦种子成苗

① 小麦，禾本科植物，一年生；小麦种子（川育20），春性，中熟，全生育期191天左右。幼苗半直立，分蘖力强，叶色绿，生长势旺。株高92厘米左右，略开张、整齐，成株叶片中等长宽斜上举。穗层整齐，结实性好。穗长方形，长芒，白壳，白粒，籽粒粉质：半角质，均匀、饱满。平均亩穗数22.5万穗，穗粒数39.5粒，千粒重45.7克。抗倒力较弱。抗病性鉴定：高抗条锈病，慢叶锈病，中感赤霉病，高感白粉病。适宜在长江上游冬麦区的四川中西部、贵州中西部、重庆中西部、陕西汉中地区、湖北襄樊地区、云南中部、甘肃南部种植。

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② 烯效唑（Uniconazole），分子式为C15H18ClN3O，属广谱性、高效植物生长调节剂，兼有杀菌和除草作用，是赤霉素合成抑制剂。具有控制营养生长，抑制细胞伸长、缩短节间、矮化植株，促进侧芽生长和花芽形成，增进抗逆性的作用。其活性较多效唑高6-10倍，但其在土壤中的残留量仅为多效唑的1/10，因此对后茬作物影响小，可通过种子、根、芽、叶吸收，并在器官间相互运转，但叶吸收向外运转较少。向顶性明显。适用于水稻、小麦，增加分蘖，控制株高，提高抗倒伏能力。其中用于水稻、大麦、小麦以10～100mg/L喷雾，

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用于观赏植物以10～20mg/L喷雾。烯效唑的高效、广谱、内吸的杀菌作用，对稻瘟病、小麦根腐病、玉米小斑病、水稻恶苗病、小麦赤霉病、菜豆炭疽病显示良好的抑菌作用。

③ 通过本次实验研究，测出烯效唑在形态和生理方面对小麦（川育20）的影响，并了解烯效唑在植物上的研究现状、前景和应用，为进一步提高烯效唑在农业上的开发应用提供理论依据。 1. 材料与方法 1.1 材料

1.1.1 材料名称

小麦种子（川育20），CK、10、20、40mg/L的烯效唑，0.1%HgCl2（预处理使用，教师已完成，学生实验中并未使用）， 1.1.2 材料来源

植物生理学教研室提供

1.1.3 材料预处理（已由教师完成）

a选种：选用具有生活力的种子（川育20号）；

b消毒：用0.1%HgCl2消毒10分钟后，用清水冲洗若干次，直到把种子表面的0.1%HgCl2 冲洗干净；

c浸种：以蒸馏水为对照，分别以CK、10、20、40mg/L的S3307浸种24h； d催芽：在25℃~28℃的温度下催芽3天。 1.2 方法

1.2.1 幼苗的栽培与管理

a栽苗 ：每一小组选定一种S3307浓度处理的发芽种子60粒，分别栽于两个烧杯中（30粒/杯）。（注意浓度标记）

b管理：以每大组（CK、10、20、40mg/L）为单位，将其放于4-24生长室培养，三天后观察加少量水分管理。定期测定形态和生理指标。 1.2.2 测定方法

1.2.2.1 幼苗形态指标的测定

1.2.2.1.1 株高、根长、根数的测定：取10株长势相同的植株分别量取茎长、根长、发根数各取平均值。

1.2.2.1.2 根冠比（R/T）的测定：将上一步测定的10苗材料按地上部分和地下部分分开，分别装入两个铅盒中，先置于105℃烤箱杀青10分钟后，降温至80℃恒温烘干至恒重（约5小时），称重记录。

1.2.2.2. 幼苗生理指标的测定

[1]

1.2.2.2.1 小麦幼苗根系活力的测定（TTC法）

a标准曲线的制作：标准曲线的制作：用1mg/ml的TTC配制成50ml 20μg/ml的TPF溶液，并将TPF溶液配制成0、2、4、6、8、10、12、14μg/ml各10ml。

b样品处理：选取约发芽种子15个，切下约1cm长45~50条根尖，吸干表面水分，迅速投入盛有反应混合液的小瓶中（反应混合液：磷液2ml+0.4％TTC2ml），放入37℃水浴保温1小时后，取出根尖吸干后，置研钵中加2~3ml乙酸乙酯研磨。

c活力测定：吸取红色提取液移入管理，并用少量乙酸乙酯洗涤残渣1次，合并入试管中，最后加乙酸乙酯定容10ml，在485nm处比色测定其吸光度。 计算公式：

根系活力（ugTPF·g-1FW·h-1）=C×V×100/N×t C：由标准曲线查得的浓度（mg·ml-1） V：提取液体积(ml)

N:根数 t:反应时间(h)

[2]

1.2.2.2.2 幼苗叶绿素含量的测定（分光光度法） a色素提取:剪取5片叶的中段（约4cm长），剪细、混匀称取0.1g，放入研钵中，加入少许碳酸钙、石英砂和80％乙醇充分研磨，过滤入25ml容量瓶中。用80％乙醇反复洗涤残渣，滤纸至无绿色，合并滤液，定容25ml容量瓶中。

b比色测定：以80％乙醇作参比液，在分光光度计663nm、645nm处比色测其光密度。 计算公式：

Chla含量（mg·g-1）=(12.7OD663-2.69OD645) ×V/1000W Chlb含量（mg·g-1）=(22.9OD645-4.68OD663)×V/1000W Chl总含量（mg·g-1）=(20.2OD645+8.02OD663) ×V/1000W OD ；测定波下的光密度值 V：叶绿素提取液总体积（ml）

W:材料鲜重（g）

[3]

1.2.2.2.3 游离脯氨酸的测定（酸性茚三酮比色法）

a脯氨酸的浸提：取小麦幼苗20片剪碎混合，称取0.5g，加少量80％乙醇，在研钵中研磨成匀浆（可加少许石英砂）。将匀浆转入大试管，用乙醇洗涤研钵，洗涤液转入试管，乙醇总量10ml，摇匀，加塞，在沸水浴中浸提20分钟。

b脱色与去杂：向大试管中加约0.2g活性炭和0.5g人造沸石，剧烈振荡5~6分钟，过滤，滤液滤入25ml容量瓶。用水洗涤试管、残渣，洗涤液一并转入容量瓶，加乙醇定容至刻度。（如上述样品液有绿色，应再取10ml左右加活性炭脱色、过滤，滤液入干燥试管。） c显色反应：吸取2ml滤液于干燥的15ml刻度试管，加2ml冰醋酸、2ml酸性茚三酮，加塞，置沸水浴中。同时，以80％乙醇代替滤液，作空白（显色同上）。反应15分钟，将空白及样品从沸水中取出，在冷水中冷却。

d比色：以乙醇作参比液，在分光光度计上515nm波长下测定样品反应液的光密度，根据光密度值从标准曲线上查出样品液的脯氨酸浓度。

e标准曲线的制作：用标准脯氨酸溶液配制成含脯氨酸0、2、4、8、12、16、20μg/ml的溶液。按上述相同方法取各浓度溶液、冰醋酸、酸性茚三酮显色、比色。以脯氨酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标绘制标准曲线。 计算公式：

样品中脯氨酸的含量（ug·g-1dw）=Cx×V/dw C:样品液的脯氨酸浓度（ug·ml-1） V:提取液总体积（ml） dw:样品干重（g）

[4]

1.2.2.2.4 膜脂过氧化产物丙二醛含量的测定

2

a MDA提取：取小麦幼苗叶片剪成0.5cm左右的小段块，称取1g放入研钵中，加入2ml 10%TCA和少量石英砂研磨成匀浆，再加入8ml 10%TCA继续研磨均匀。混匀倒入离心管，在3000转/分下离心10min，上清液即为提取液。

b显色测定：10ml刻度试管2支，一支加入上清液3ml，另一支加入TCA3ml（空白），各加0.5％的TBA溶液3ml，摇匀，在沸水浴中煮沸10分钟（溶液出现小气泡时开始计时），立即在冷水中冷却。如有沉淀，应离心。以空白作参比，在分光光度计430nm、532nm、600nm下测定样品反应液的消光值（用1cm光径的比色杯）。 计算公式：C（μmol/L）=6.45(OD532-OD600)-0.56OD450 MDA含量（μmol·g-1FW）=（C*V*10-3）/W 2. 结果与分析

2.1 小麦幼苗形态指标测定

表1 不同浓度S3307对小麦形态指标的影响

处理浓度 平均株高 平均根长 平均根数 平均根冠比（R/T） （mg/l） （cm） （cm） （条） CK 3.21 6.15 11 0.46 10 1.90 11.65 9 0.63 20 1.76 8.47 8.8 0.62 40 1.60 7.43 8 0.60

结果分析：从表1可以得出烯效唑可抑制小麦地上部分的生长、促进地下部分伸长、抑制生根数、增大根冠比，且随着烯效唑浓度增加，小麦株高越小、根长越小但仍大于CK的根长、根数减少、根冠比减小但仍大于CK根冠比。 2.2 小麦幼苗生理指标测定