作 业 指 导 书
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可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯 霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量 的测定液相色谱-串联质谱法
编号：XZJY086-00-2019 版本：第一版 第0次修改
编制： 审核： 批准：
实施日期：2019.01.01
作业指导书 可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 一、编制目的
文 件 编 号： XZJY086-00-2019 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 1/7 实 施 日 期： 2019.01.01 为规范可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的检验方法，编制本指导书。 二、适用范围
本指导书适用于可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定。 三、编制依据
GB/T 20756-2006《可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定》 四、实验原理
试样中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考在碱性条件下，用乙酸乙酯提取，提取液旋转蒸干后，残渣用水溶解，经正己烷液液分配。 五、试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T6682规定的一级水。 5.1 试剂
5.1.1 甲醇：色谱纯。 5.1.2 乙酸乙酯。 5.1.3 正己烷。
5.1.4 氢氧化铵25％~28％。
5.1.5 无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。 5.1.6 氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准物质：纯度≥99.5％。
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作业指导书 可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 5.1.7 氘代氯霉素内标标准溶液：100μg/mL。
文 件 编 号： XZJY086-00-2019 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 2/7 实 施 日 期： 2019.01.01 5.1.8 标准储备溶液：100μg/mL。分别准确称取适量的氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准物质，用甲醇配成100μg/mL的标准储备溶液于100mL，该 溶液于-18℃保存，可使用1年。
5.1.9 混合标准储备溶液：1μg/mL。分别准确吸取1mL氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇稀释成刻度。该溶液于-18℃保存，可使用6个月。
5.1.10 中间浓度混合标准溶液：20ng/mL。准确吸取1mL混合标准储备溶液于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度。该溶液于4℃保存，可使用3个月。 5.1.11 内标标准储备溶液：1μg/mL。准确吸取100μL，氘代氯霉素（D5-氯霉素）标准溶液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于-18℃保存，可使用6个月。
5.1.12 中间浓度内标溶液：20ng/mL。准确吸取1mL内标标准储备溶液于50mL容量瓶中，用水稀释成刻度。该溶液于4℃保存，可使用3个月。 5.1.13 基质混合标准工作溶液：根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的中间浓度混合标准溶液和中间浓度内标溶液，用空白样品提取液配成系列浓度的基质混合标准工作溶液，内标浓度均为0.3ng/mL。当天配制。
5.1.14 滤膜：0.2μm. 5.3 标准品
氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准物质：纯度≥99.5％。。 5.4 标准溶液配制
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作业指导书 可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 文 件 编 号： XZJY086-00-2019 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 3/7 实 施 日 期： 2019.01.01 5.4.1 标准储备溶液：100μg/mL。分别准确称取适量的氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准物质，用甲醇配成100μg/mL的标准储备溶液于100mL，该溶液于-18℃保存，可使用1年。
5.4.2 混合标准储备溶液：1μg/mL。分别准确吸取1mL氯霉素、甲砜霉素 和氟苯尼考标准储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇稀释成刻度。该溶液于-18℃保存，可使用6个月。
5.4.3 中间浓度混合标准溶液：20ng/mL。准确吸取1mL混合标准储备溶液于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度。该溶液于4℃保存，可使用3个月。 5.4.4 内标标准储备溶液：1μg/mL。准确吸取100μL，氘代氯霉素（D5-氯霉素）标准溶液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于-18℃保存，可使用6个月。
5.4.5 中间浓度内标溶液：20ng/mL。准确吸取1mL内标标准储备溶液于50mL容量瓶中，用水稀释成刻度。该溶液于4℃保存，可使用3个月。 5.4.6 基质混合标准工作溶液：根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的中间浓度混合标准溶液和中间浓度内标溶液，用空白样品提取液配成系列浓度的基质混合标准工作溶液，内标浓度均为0.3ng/mL。当天配制。 六、仪器和设备
6.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 6.2 分析天平:感量0.0001g和0.01g。 6.3 离心机：4000r/min。
6.4 高速台式离心机：13000r/min。
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作业指导书 可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 6.5 组织捣碎机。 6.6 匀质器。 6.7 旋转蒸发器。 6.8 超声波。 6.9 液体混匀器。
6.10 聚丙烯离心器：50mL，1.5mL，具塞。 6.11 鸡心管：25mL。 6.12 比色管：50mL具塞。 七、试样制备与保存 7.1 试样制备
文 件 编 号： XZJY086-00-2019 版本号/修订状态： 一/第0次修改 页码/总页数： 4/7 实 施 日 期： 2019.01.01 取样品约500g用肉类组织捣碎机搅碎，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。 7.2 试样的保存
将试样于-18℃冰箱中保存。 八、测定步骤 8.1 提取
称取5g试样，精确至0.01g。置于50mL聚丙烯离心管中，加入中间浓度内标溶液75μL,加入15mL乙酸乙酯，0.45mL氢氧化铵，5g无水硫酸钠，匀质提取30s，以4000r/min离心5min，上清液转移至50mL比色管中。另取一个50mL离心管，加入15mL乙酸乙酯，0.45mL氢氧化铵，洗涤匀质刀头10s，洗涤液移入第一支离心管中，用玻璃棒搅动残渣，于液体混匀器上涡旋提取1min，超声波提取5min，以4000r/min离心5min，上清液合并至
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