(2)过程②诱导融合的方法是______________________，过程②选用的骨髓瘤细胞____________(填“能”或“不能”)在HAT培养基上生长。
(3)经过程③筛选得到的细胞还需转移至多孔培养板中进行过程④，原因是________________________________________________________________________。 (4)请根据所学知识，用箭头和文字补全图中方框内获取单克隆杂交—杂交瘤细胞的生产过程。
(5)获得的单克隆杂交—杂交瘤细胞在体外条件下培养或__________________________，均可提取出大量的双特异性单克隆抗体。
答案 (1)使小鼠产生能分泌识别癌胚抗原抗体的B淋巴细胞 动物细胞融合、动物细胞培养 (2)聚乙二醇(PEG)诱导、电激等 不能 (3)从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型(筛选得到的杂交瘤细胞产生的抗体不是单克隆抗体) (4)将获得的B淋巴细胞与单克隆杂交瘤细胞融合→在选择培养基上筛选出杂交—杂交瘤细胞→克隆化培养、抗体检测筛选出单克隆杂交—杂交瘤细胞 (5)注射到小鼠腹腔内增殖
解析 (1)过程①表示给小鼠注射抗原，目的是刺激小鼠产生能分泌识别癌胚抗原抗体的B淋巴细胞；根据单克隆抗体制备流程可知，该过程涉及到的技术有动物细胞融合技术、动物细胞培养技术。
(2)过程②诱导细胞融合的方法有聚乙二醇、灭活病毒、电激等；HAT选择培养基的作用是筛选出杂交瘤细胞，而骨髓瘤细胞不能生长。
(3)从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型(筛选得到的杂交瘤细胞产生的抗体不是单克隆抗体)，因此经过程③筛选得到的细胞还需转移至多孔培养板中进行过程④。 (4)单克隆抗体制备过程为：将获得的B淋巴细胞与单克隆杂交瘤细胞融合→在选择培养基上筛选出杂交—杂交瘤细胞→克隆化培养、抗体检测筛选出单克隆的杂交—杂交瘤细胞。 (5)获得的单克隆杂交—杂交瘤细胞在体外条件下培养或注射到小鼠腹腔内增殖，均可提取出大量的双特异性单克隆抗体。
4．科学家培育转乳糖分解酶基因奶牛的过程如图所示。请回答下列问题：
(1)图中细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有________。在进行细胞原代培养时会出现____________________和细胞接触抑制现象。为了
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防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的____________。 (2)图中将乳糖分解酶基因导入胚胎成纤维细胞中，最常用的方法是____________。 (3)图中的核移植操作需要将经过细胞培养获得的供体细胞的细胞核注入去核的卵母细胞中，去掉卵母细胞细胞核的目的是保证克隆动物的核遗传物质全部来自____________________，而所用的供体细胞一般都选用传代培养10代以内的细胞，原因是传代培养10代以内的细胞能保持正常的________________。
(4)重组细胞2在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛体内会生出与图中的黑白花奶牛性状并不完全相同的犊牛，原因可能有_____________________________________________ _______________________________________________________________(至少答出两点)。 (5)单克隆抗体的制备也需要构建重组细胞，该重组细胞是将________________________融合而成的。
答案 (1)血清 细胞贴壁生长 抗生素 (2)显微注射法 (3)供体细胞的细胞核 二倍体核型 (4)生物的性状受细胞核和细胞质中遗传物质共同控制，还受环境因素的影响、胚胎成纤维细胞的遗传物质有近一半来自配种的公牛等 (5)骨髓瘤细胞和免疫过的B淋巴细胞
解析 (1)在动物细胞培养的合成培养基中，通常需加入动物血清等天然成分。在进行细胞原代培养时会出现细胞贴壁生长和细胞接触抑制现象。向培养液中加入适量的抗生素，可以防止细胞培养过程中细菌的污染。(2)将目的基因导入动物细胞常用显微注射法。(3)核移植过程中，去掉卵母细胞细胞核的目的是保证克隆动物的核遗传物质全部来自供体细胞的细胞核。原代培养10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型，因此所用的供体细胞一般都选用原代培养10代以内的细胞。(4)由于生物的性状受细胞核和细胞质中遗传物质共同控制，生物的性状还受环境因素的影响，胚胎成纤维细胞的遗传物质有近一半来自配种的公牛等，因此重组细胞2在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛体内会生出与图中的黑白花奶牛性状并不完全相同的犊牛。(5)单克隆抗体的制备过程中，将骨髓瘤细胞和免疫过的B淋巴细胞融合构建重组细胞(杂交瘤细胞)。
5．(2018·福州高三下学期质检) 莴苣易受软腐病菌的感染，野生甘蓝具有软腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理窝苣原生质体可使其染色体片段化，并丧失增殖能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的野生甘蓝原生质体融合，以获得抗软腐病杂种植株。流程如下图所示：
据图回答下列问题：
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(1)过程①所需的酶是____________________________。
(2)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的__________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。进一步对杂种植株进行____________接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
(3)为研究甘蓝的A基因与抗性是否有关，科研人员提取野生甘蓝的DNA，将氨苄青霉素的抗性基因(N基因)插入A基因中，替换A基因的中间片段，如图所示。
为达到上述目的，用限制酶处理后，在A1片段与N基因、N基因与A3片段间要有______________。要使改造后的A基因能表达出N基因所编码的蛋白质，插入的N基因前端应包含______________________。PCR扩增改造后的A基因，转入野生甘蓝细胞中，并用加入__________的培养基筛选，获得的甘蓝细胞，其愈伤组织培育后发现也非常容易感染软腐病，表明A基因是_____________________________________________________。 答案 (1)纤维素酶和果胶酶 (2)叶绿体 软腐病菌 (3)互补的黏性末端 启动子 氨苄青霉素 抗性基因
解析 (1)过程①表示原生质体的制备，要用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁。 (2)用于融合的两个细胞，一个是莴苣的叶肉细胞，一个是抗性甘蓝的根部细胞，其中供体细胞特有的结构是叶绿体，可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志。进一步对杂种植株进行软腐病菌接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
(3)将氨苄青霉素的抗性基因(N基因)插入A基因中，需要用限制酶分别处理获得氨苄青霉素的抗性基因和A1、A3片段，且A1片段与N基因、N基因与A3片段间要有互补的黏性末端，才能达到目的。要使改造后的A基因能表达出N基因所编码的蛋白质，插入的N基因前端应包含启动子。PCR扩增改造后的A基因，转入野生甘蓝细胞中，并用加入氨苄青霉素的培养基筛选，获得的甘蓝细胞，其愈伤组织培育后发现也非常容易感染软腐病，表明A基因是抗性基因。
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