试验六影响酶促反应速度的因素

实验六 影响酶促反应速度的因素

【目的】

观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 【原理】

唾液淀粉酶催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。

在不同温度，不同PH值下，唾液淀粉酶活性不同，催化淀粉水解程度不一，生成的产物也就不同。此外，激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性，影响淀粉的水解。因此可根据在不同反应条件下，溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度，从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

淀粉 I2 呈蓝色 淀粉酶 糊精 淀粉酶麦芽糖+葡萄糖 无色?I2蓝色、紫色、红色 I2 【器材】

试管（10mm×100mm）、试管架、电热恒温水浴箱、沸水浴、冰浴、多孔白瓷板、滴管。 【试剂】

1.1%淀粉溶液 同实验五 2. 稀碘溶液

称取碘2g，碘化钾4g，溶于1 000蒸馏水中，置棕色试剂瓶中。 3.缓冲液

（1）pH3.0缓冲液 取0.2mol/LNa2HPO4溶液205ml，0.1mol/L柠檬酸溶液795ml，混合后即成。

（2）pH6.8缓冲液 同实验五

（3）pH8.0缓冲液 取0.2mol/LNa2HPO4溶液972ml，0.1mol/L柠檬酸溶液28ml，混合后即成。

4.1%NaCl溶液

称取氯化钠1g，加蒸馏水至100ml即成。 5.1%CuSO4溶液

称取结晶硫酸铜1g，加蒸馏水至100ml。

6.1%Na2SO4溶液

称取硫酸钠1g，加蒸馏水至100ml即成。 7.稀释唾液 同实验五。 【操作】

1.温度对酶促反应速度的影响

取3支试管，编号，按下表操作：

表3-8 温度对酶促反应的影响

加入物（滴） pH6.8缓冲液 1%淀粉溶液

稀释唾液

1 20 10

置37℃水浴5分钟

5

置37℃水浴10分钟

2 20 10

置沸水浴5分钟

5

置沸水浴10分钟

3 20 10

置冰水浴5分钟

5

置冰水浴10分钟

取出，各管加入碘液1滴，摇匀，观察并记录颜色变化。 2.PH对酶促反应速度的影响 取3支试管，编号，按下表操作：

表3-9 pH对酶促反应的影响

加入物（滴） pH3.0缓冲液 pH6.8缓冲液 pH8.0缓冲液 1%淀粉溶液 稀释唾液

1 20 － － 10 5

2 － 20 － 10 5

3 － － 20 10 5

摇匀，置37℃水浴保温，每隔1分钟从2号管中吸取1滴反应液于白瓷板上，加碘液1滴检查反应进行情况，直至反应液不与碘液反应时，向各管各加入1滴碘液，摇匀，观察并记录颜色变化。

3．激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响 取4支试管，编号，按下表操作：

表3-10 激活剂和抑制剂对酶活性的影响

加入物（滴） 1%淀粉溶液

1 10

2 10

3 10

4 10

pH6.8缓冲液 1% NaCl溶液 1% CuSO4溶液 1%Na2SO4 蒸馏水 稀释唾液

20 － － － 10 5

20 10 －

－ 5

20 －

10 － 5

20

10 5

混匀，置37℃水浴中保温10分钟

取出，各管加入碘液各1滴，观察并记录颜色变化。 【结果及分析】

观察各管颜色变化，说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。

【思考题】

1. 何谓最适温度？温度对酶促反应有何影响？激活剂和抑制剂？ 2. 何谓最适pH？PH对酶促反应有何影响

3．何谓激活剂、抑制剂？激活剂、抑制剂对酶促反应速度有何影响？