微生物的培养与应用
学校：__________姓名：__________班级：__________考号：__________
1、下列生物学实验操作中，能顺利达到实验目的的是 ( ) A.利用五点取样法抽样调查国道两侧隔离带中一枝黄花的密度 B.利用在牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素筛选能分解尿素的细菌 C.在固体培养基上稀释涂布大肠杆菌培养液获得单菌落
D.切取小块植物叶片直接接种到某种植物组织培养基上获得植株
2、反刍动物如牛和山羊，具有特殊的器官一瘤胃，瘤胃中生活着多种微生物，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究，请回答：
（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是 (多选)。 A.酒精灯 B.培养皿 C.显微镜 D.无菌水 E.接种环
（2）向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是 。
（3）刚果红可与 形成红色复合物，研究人员在刚果红培养基平板上，筛
选到了几株有透明降解圈的菌落(见图1)。图中降解圈大小与纤维素酶的 有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是 (填图中序号）。
（4）纤维素酶高产菌株在-20℃长期保存时，菌液中常需加入一定量的 保藏。
（5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株A和B，在不同温度和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2，推测菌株 更适合用于人工瘤胃发酵，理由是 。
3、生物固氮是固氮微生物将大气中的氮还原成氨的过程，将固氮微生物菌剂施入土壤，可提高土壤氮素含量，促进作物生长。回答下列问题：
（1）为了筛选固氮菌，所用琼脂使用前用蒸馏水浸泡、洗涤3次，目的是 。为增加固氮菌的数目，分离纯化前需要进行 培养，以增加固氮菌总数目。
（2）用来筛选固氮菌更为简单的接种方法是 ，操作要点有 （答出两点即可）。
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（3）经过初步培养后，研究人员将获得的某固氮菌液进行梯度稀释，吸取10稀释倍数的菌液各0.1mL，分别涂布在三个平板上，一段时间后形成的菌落数依次为18、17、19，该同学以平均菌落数18进行计数，可求得原菌液固氮菌的浓度为 个/L。你认为该同学的计数方法是否正确？ （填“正确”或“不正确”），说明理由 。
4、某罐装泡菜制造厂希望通过改良现有的乳酸菌菌种提高泡菜中的乳酸产量。请回答相关问题：
（1）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是___________。
（2）要改良现有的乳酸菌种的育种方式的原理是__________。菌种经过处理后，再接种于经过___________________________法灭菌处理的_______(填“固体”或“液体”）培养基中，28d振荡扩大培养。
（3）已知“改良MC琼脂培养基”中含有碳酸钙，遇酸溶解而使培养基变得透明；“孟加拉红琼脂培养基”含氯霉素，可抑制绝大多数细菌的生长。对乳酸菌进行计数时应选择上述_____________培养基，用_______________________方法接种，挑选出具有透明圈的菌落进行计数。如果每个平板均接种了0．l mL样品并培养，接种的4个平板菌落数分别是210、230、470、190，则样品中菌种A的数量为__________个/mL。平板划线法一般不用于活菌计数的原因是_________________________________。
5、塑料（聚乙烯）在自然界中很难降解，俗称“白色污染”，北京航天大学杨军教授偶然发现装米的塑料袋上有许多孔洞，还有虫子和飞蛾爬出。带着这些疑问，杨军教授对虫子消化道的微生物进行分离，从而找到了能降解塑料的微生物，回答有关问题：
（1）实验室分离聚乙烯塑料降解菌时应当以_________为唯一碳源。在获取肠道微生物后应先进行选择培养，其目的是__________,选择培养时所用的培养基从物理性质上属于____________培养基。
（2）对选择培养后的微生物分离时，可以釆用平板划线法和稀释涂布平板法，当采用平板划线法分离微生物时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是___________，当釆用稀释涂布平板法分离微生物时，_________(需要/不需要）进行梯度稀释。两种方法都得到了多种菌落，根据它们的菌落特征对细菌进行分类，菌落特征包括菌落形状、大小、________和__________等方面。
6、大肠杆菌与我们日常生活关系非常密切，它寄生在人体的大肠和小肠里，结构简单，繁殖迅速，容易培养，是生物学上重要的实验材料。正常情况下，大多数大肠杆菌不但不会给我们的身体健康带来任何危害，反而还能竞争性抵御致病菌的进攻，同时还能帮助人体合成维生素K2，与人体是互利共生的关系。
(1)实验室常用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养。下表为培养基配方(配制1 000 mL)：
[]成分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 用量 5.0 g 10.0 g 5.0 g
①表中的牛肉膏和蛋白胨主要为大肠杆菌的培养提供_____等营养物质(至少答两点)；NaCl的作用是_____(至少答两点)。
②为了达到纯化目的，该配方中还应该加入_____。
③培养基的配制过程为：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。其中溶化后灭菌前一定要进行的操作是调pH，培养细菌时需将培养基的pH调至_____。
④纯化大肠杆菌：微生物接种最常用的方法是_____和_____，前者不仅能纯化而且能计数。
(2)大肠杆菌分解乳糖产生酸，因细菌带正电会被伊红染成红色，再与美蓝结合会形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。在牛肉膏蛋白胨固体培养基加入一定量的伊红—美蓝溶液，这样的培养基是_ __(填“选择”或“鉴別”)培养基。中国的卫生标准是每1 000 mL饮用水中大肠杆菌不得超过3个，在培养基上每1 000 mL合
格饮用水形成的菌落数____(填“大于”、“小于”或“等于”)3个，原因是_____。 7、35%～40%的甲醛水溶液(福尔马林)可作为防腐剂，其防腐的原理是使蛋白质变性。自然界中有能分解甲醛的细菌和真菌。下图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程。
（1）②过程的目的是_______________________，③过程培养出的是_______________。培养基灭菌的常用方法是利用高温可以使微生物的_________________等物质发生变性。
（2）通过④培养能获得__________。若下图甲表示在平板培养基上的第一次和第二次划线，请在图乙中画出第三次划线，划线后在恒温培养箱中培养时，培养皿须倒置，目的是_________________。
（3）经过⑤过程后，取样测定甲醛浓度，选出__________________________，再分离、培养菌株。 为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响，做了有关实验并得到如下图结果
（4）由上图可知，当甲醛的初始浓度小于1 200 mg/L时，菌株________________________；当甲醛的初始浓度增高至1 600 mg/L时，48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可能是______________。 8、下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。 实验步骤：
①把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基1的表面，进行培养。 ②待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基二上，随即在影印到含链霉素的培养基3上，进行培养。
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