（一）：30%丙烯酰胺溶液
Acry 29% Bis 1%
配制好了以后棕色瓶保存
(二):10%的SDS
(三):10%的过硫酰胺(Aps)(临用前配制)
(四):1.5mol/L的Tris缓冲液(PH:8.8)(分离胶缓冲液) (五): :1.0mol/L的Tris缓冲液(PH:6.8)(浓缩胶缓冲液) (六):电极缓冲液的配制
(1) 0.25M tris(PH:8.3) 0.192M Glycine
0.1% SDS
(2) 4x蛋白电泳缓冲液(PH8.3)(高血压)
Tris 6.0g
Glycine 28.8g 10%SDS 20ml
用DH2O定溶到500ml (七):转移缓冲液的配制(1000ml)
(1)Glycine 2.9g Tris 5.8g SDS 0.37g 甲醇(20%) 200ml 用DH2O定溶1000ml.
(2) Tris 2.42g(高血压) Glycine 11.26g 甲醇 200ml
用HCL调PH到8.3,用DH2O定溶到1000ml (八):2XSDS上样缓冲液(100ml)
Tris(PH6.8) 100mmol SDS 4% 溴芬兰 0.2% 甘油 20%
DTT 200mmol(最后加) (九):蛋白电泳缓冲液(高血压)
10%SDS 2.0ml 甘油 1.0ml 0.5M Tris(pH6.8) 1.6ml ?-羟基乙醇 0.5ml 溴芬兰 2mg 用DH2O定溶到10ml (十):脱色液(高血压)
甲醇 150ml 冰醋酸 75ml 用DH2O定溶到1000ml
(十一):脱色液(查书的)
甲醇 500ml 冰醋酸 100ml
用DH2O定溶到1000ml (十二):丽春红储存液(100ml)
丽春红.S 2g 三氯乙酸 30g 黄基水杨酸 30g 用DH2O定溶到100ml （十三）：考马斯亮蓝染液(高血压)
考马斯亮蓝R-250 1.25g
DH2O 50ml溶解以后加 甲醇 250ml 用DH2O定溶到500ml (十四):10X TBS
Tris 24.2g NaCl 80g 用HCl调PH7.6 (十五):1X TBST洗膜液
DH2O 900ml 10X TBS 100ml tween-20 0.5ml (十六):封闭液(高血压)
脱脂奶粉 5g PBST(0.01M) 100ml
(十七):PBST的配制(0.01M)(高血压)
NaCl 8g KCl 0.20g Na2HPO4 3.48g KH2PO4 0.20g DH2O定溶到1000ml
以上为0.01M的PBS配制,0.01M PBS加Tween-80. (十八):抗体稀释液的配制(100ml)
10X TBS 10ml DH2O 90ml BSA 5g Tween-20(100%) 100ul
(十九):转移缓冲液(PH8.3)(查书的)
Tris 12.0g Glycine 57.65g DH2O 4000ml
在Tris和Glycine溶解以后,加1000ml的甲醇,用HCL调PH8.3.
(二十):PBS-Tween缓冲液(查书的)
2.5ml20%Tween-20溶于1000mlPBS中
(二十一):蛋白质体外匀浆缓冲液的配制 Tris-Cl(PH7.5)(高血压) Tris 50mmol NP40 1ml TritonX-100 1ml SDS 0.1g Nacl 150mmol EDTA 2mmol EGTA 1mmol DH2O 定溶到100ml
丙烯酰胺(Acrylamide)
N，N-亚甲双丙烯酰胺(N,N-methylene bisacrylamide) 过硫酰胺（Aps）
N，N，N，N’-四甲基乙烯二胺(TEMED) 二硫苏糖醇(DTT) Tween-20 甘氨酸
BSA(牛血清白蛋白) 碳酸钠 酒石酸钠 硫酸铜
二辛可酸二钠(Bicinchoninic acid) 眼科袋 SDS
（一）材料和器材
蛋白质提取试剂盒（RIPA，购于申能博彩） 低温高速离心机 1.5ml无菌离心管 1ml的吸头以及加样枪 组织匀浆杯,组织匀浆器 (二) 方法
1. 每100mg的组织或106 个细胞加入1mlRIPA和10ulPMSF(PMSF不能预先加到RIPA中,否则PMSF失去效能).如果是动物样品可以用玻璃或电动匀浆,匀浆杯需要放在冰里,间或匀浆,避免起泡沫和发热,冰里匀浆;如果是细胞样品,直接用1ml的吸头吹打,冰里放置30min. 2. 将样品转移到1.5ml的离心管中,4度,20000g离心30min
3. 将上清液小心转移到干净无菌的1.5ml的离心管中,-20度保存.
4. 抽提的样品在使用前根据需要确定是否要稀释.蛋白浓度的确定可以使用Lowry或BCA方法.空白对照,采用RIPA.
（一）原理：在碱性溶液中，蛋白将二价铜还原成一价铜，后者与试剂中的BCA（二辛可酸，Bicinchoninic acid）形成一个在562nm处具有最大吸光度的紫色复合物,其吸光度与蛋白浓度成正比,线形范围20~100ug/ml. (二) 材料和仪器
1. 试剂A:1?A二纳盐,2%碳酸钠,0.16%酒石酸纳,0.4%的氢氧化纳和0.95%碳酸氢纳.用50%的氢氧化纳或碳酸氢纳调PH11.25 2. 试剂B:4%的硫酸铜.
3. 工作液:100倍体积的试剂A与2倍体积试剂B混合/ (三)操作步骤
1. 准确称取10mg的标准蛋白(常用牛血清白蛋白或人血清白蛋白)加蒸馏水溶解定溶到100ml.
2. 取6支试管分别编号为0~5,分别加入步骤1制备的标准蛋白溶液0,20,40,60,80,100ul,并用蒸馏水补足体积到100ul. 3. 各试管加入工作液2ml,混匀,37度水浴保温30min.
4. 在分光光度计上,以0为参比,测定各管样品在562nm的吸光度值. 5. 以蛋白浓度为横座标,吸光度为纵座标,绘制标准曲线.
6. 取样品溶液100ul,按步骤1~4测定,将测得的吸光度值代入上述标准曲线,并计算蛋白浓度.如果样品的浓度过高,可用水做适当的稀释.
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