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C．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平(或性状水平)的操作 D．基因工程完全不同于蛋白质工程
解析 蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程，是从分子水平对蛋白质进行改造设计，然后直接对相应的基因进行修饰加工甚至人工进行基因合成，从而对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。而基因工程只是将外源基因导入另一生物体内，并使之表达，体现人类所需的性状，或者获取所需的产品，因此，基因工程在原则上只能生产自然界中已存在的蛋白质。 答案 B
二、非选择题(共3小题，共40分)
13．(12分)农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞采用最多的方法。下图为农杆菌转化法示意图，请据图回答问题。
(1)Ti质粒多存在于细菌中，它是能自我复制的________。
(2)获取外源基因(目的基因)需要限制酶的参与，而目的基因在重组过程中需要________酶的参与，并依据碱基________原则进行重组。
(3)Ti质粒原存在于________中，其上的T-DNA具有可转移到受体细胞并整合到受体细胞的________上的特点，因此携带外源基因的DNA片段必须插入到________部位。 (4)农杆菌转化法适于将目的基因导入________和祼子植物，而不易于感染大多数________。
(5)若将相关的目的基因导入动物细胞或微生物细胞则常采用________和________。 解析 将目的基因导入受体细胞的方法多种多样，应根据受体细胞的类型和目的基因的特点分别采用相应的方法。农杆菌转化法适于将目的基因导入植物细胞，而显微注射技术和Ca2处理法感受态细胞法分别适于将目的基因导入动物细胞和微生物细胞。 答案 (1)小型环状DNA分子 (2)DNA连接 互补配对 (3)农杆菌细胞质 染色体
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DNA T-DNA片段(内部) (4)双子叶植物 单子叶植物 (5)显微注射技术 Ca2处理法感受态细胞法
14．(12分)2011年11月，武汉大学利用细菌将人的血清白蛋白基因导入水稻体内，借助水稻合成了人的血清白蛋白，这种蛋白质和人体自然产生的这类物质是完全一致的，这一成果轰动了生物界。结合图示回答转基因水稻培育过程的相关问题。
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(1)限制酶Mun Ⅰ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是—CAATTG—和—GAATTC—。为保证重组质粒表达载体的准确构建，应该怎样操作？______，________，________。
(2)②过程常用的细菌是________。
(3)③经历的生理过程主要有________和________两个阶段。培育出转基因水稻完整个体所依据的生物学原理是__________________________________。
(4)基因工程的最后步骤是目的基因的检测与鉴定，在此步骤可对培育的植株进行分子水平的检测，可检测的物质有______________、____________、______________。 解析 (1)目的基因的两侧是限制酶EcoRⅠ的识别序列，因此需用限制酶EcoR Ⅰ切割含目的基因的DNA分子；但是若用限制酶EcoRⅠ切割质粒，会破坏标记基因，因此，需用限制酶Mun Ⅰ切割质粒；用这两种酶切出的黏性末端相同，因此可用DNA连接酶连接目的基因和质粒。(2)将表达载体导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法，因此常用的细菌是农杆菌。(3)过程③是组织培养获得完整植株的过程，因此主要的过程是脱分化获得愈伤组织，经再分化获得胚状体。转基因植物的培育体现了植物细胞的全能性。(4)目的基因的检测与鉴定在分子水平上来看，应进行目的基因、转录出的mRNA和翻译出的蛋白质三种物质的检测。
答案 (1)用限制酶Mun Ⅰ切割质粒 用限制酶EcoR Ⅰ切割含目的基因的DNA分子 用DNA连接酶连接目的基因和质粒 (2)农杆菌 (3)脱分化 再分化 植物细胞的全能性 (4)人血清白蛋白基因 人血清白蛋白基因转录出的mRNA 人血清白蛋白 15．(16分)(2011·潍坊)已知SARS是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗，开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下：
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(1)实验步骤①所代表的反应过程是____________________________________。 (2)步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用
_____________________________________________________________。
(3)如果省略步骤②而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是S基因在大肠杆菌中不能________，也不能______________。 (4)为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特征，可用________与________进行抗原—抗体特异性反应实验，从而得出结论。
(5)步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列________(选填“相同”或“不同”)，根本原因是_________________________________________________________________。
解析 本题考查基因工程的工具及操作步骤和学生识图能力。(1)图中①RNA→DNA表示通过逆转录方式获得目的基因。(2)基因表达载体构建时，需要利用限制酶对载体和目的基因进行剪切，形成黏性末端，然后用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来，形成重组载体。(3)目的基因导入受体细胞后，需要借助于载体在受体细胞中进行复制而扩增目的基因，从而获得大量的表达产物，而直接导入则容易被受体细胞中的DNA水解酶所水解，导致得不到表达产物。(4)S蛋白为SARS病毒表面主要的病毒抗原，因此用抗原—抗体特异性反应实验可检测其是否具有同样的抗原性。(5)步骤④和⑥相比，基因相同，只是导入的受体细胞的种类不同，因为真核生物和原核生物共用一套密码子，所以表达产物相同。
答案 (1)逆转录 (2)限制性核酸内切酶和DNA连接酶 (3)复制 以其为模板合成S基因的mRNA(或转录) (4)大肠杆菌中表达的S蛋白 SARS康复病人血清 (5)相同 表达蛋白质所用的基因相同
B卷
(时间：45分钟 满分：100分)
考查知识点及角度[来源:数理化网]] 基因工程的操作 基因工程的应用 蛋白质工程 基础 1、2、3、4、12 6、10 难度及题号 中档 5、7、8、9 13 稍难 11、15 14 一、选择题(共12小题，每小题4分，共48分) 7
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1．在DNA连接酶的催化下形成的化学键和位置分别是
( )。
A．氢键 碱基与脱氧核糖之间 B．氢键 碱基与碱基之间
C．磷酸二酯键 磷酸与脱氧核糖之间 D．磷酸二酯键 脱氧核糖与碱基之间
解析 本题考查DNA连接酶的作用。DNA连接酶的作用只是催化DNA片段的“缝合”，能恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，不能催化氢键形成。 答案 C
2．从基因文库中获取目的基因的根据是
( )。
A．基因的核苷酸序列 B．基因的功能
C．基因的转录产物mRNA D．以上都是
解析 本题考查从基因文库中获取目的基因的方法，解题关键是理解从基因文库中获取目的基因的依据。从基因文库中获取目的基因的依据有：(1)基因的核苷酸序列；(2)基因的功能；(3)基因在染色体上的位置；(4)基因的转录产物mRNA；(5)基因的翻译产物蛋白质等。 答案 D
3．下列有关基因工程操作的叙述，正确的是
( )。
A．用同种限制性核酸内切酶切割载体与目的基因可获得相同的黏性末端 B．以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同 C．检测到受体细胞含有目的基因就标志着基因工程操作的成功
D．用含抗生素抗性基因的质粒作为载体是因为其抗性基因便于与外源基因连接 解析 一种氨基酸可对应多个密码子，以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列可能不同。只有目的基因在受体细胞中成功表达才标志着基因工程操作的成功。用含抗生素抗性基因的质粒作为载体，是因为抗性基因作为标记基因可检测载体是否导入到受体细胞中。 答案 A
4．下列关于基因文库的说法，错误的是
( )。
A．可分为基因组文库和部分基因文库
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