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其他合理答案) (4)多肽 (5)环境保护
14．(18分)科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。下图是转基因抗冻番茄的培育过程示意图。
(1)若图中Ⅱ是科学家构建的鱼抗冻蛋白基因的表达载体，则该基因表达载体的组成通常应包括____________________等。
(2)科学家常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术检测目的基因是否插入番茄的基因组。
(3)多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)可将成熟的番茄果实细胞壁中的多聚半乳糖醛酸降解为半乳糖醛酸，从而导致果实软化。抑制PG酶的活性可以延长番茄果实储藏期，请用文字描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。
____________________________________________________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________。 解析 (1)基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子及标记基因等。
(2)科学家常用农杆菌转化法将目的基因导入双子叶植物细胞。用DNA分子杂交技术，检测目的基因是否进入受体细胞。
(3)蛋白质工程的程序是从蛋白质功能出发→设计预期蛋白质的结构→推测应有的氨基酸序列→找到相应的脱氧核苷酸序列。
答案 (1)目的基因、启动子、终止子、标记基因 (2)农杆菌转化 DNA分子杂交 (3)蛋白质工程方法的步骤为：①PG酶蛋白的功能分析；②PG酶蛋白的结构预测和设计；③PG酶基因的改造
15．(18分)(江苏高考)下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题。
限制酶 识别序列及切割位点 BamHⅠ GGATCC ↓CCTAGG)) ↑ Hind Ⅲ AAGCTT ↓TTCGAA)) ↑ EcoR Ⅰ GAATTC ↓CTTAAG)) ↑ Sma Ⅰ CCCGGG ↓GGGCCC)) ↑ 13
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(1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是_________________________________________________________________。
(4)与只使用EcoRⅠ相比交，使用BamH Ⅰ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止
_________________________________________________________________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了
__________________________________________________________________ _________________________________________________________________。
解析 (1)切割前质粒为环状，不含游离的磷酸基团。切割后质粒成了一个链状的双链DNA分子，含两个游离的磷酸基团。
(2)因为SmaⅠ识别序列中均为G—C碱基对，G、C之间含三个氢键，热稳定性高。 (3)据题图可知，SmaⅠ既会破坏标记基因，也会破坏目的基因。
(4)若用同种限制性内切酶切割质粒和外源DNA中的目的基因，因为两端的黏性末端能够互补配对，会出现自身环化的情况。而用两种限制性内切酶切割，因为两端形成的黏性末端不能互补配对，不会出现自身环化。
(5)DNA连接酶可以连接具有能够互补配对黏性末端的DNA片段。 (6)标记基因可以鉴别受体细胞是否含有目的基因。
答案 (1)0、2 (2)高 (3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 (4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 (5)DNA连接 (6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
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