一． 定义，特点 1.生物技术制药
定义：生物制药就是根据生物体的这些特点从生物体（包括细胞）内制得的相关药物 特点：1. 药理学特性 ⑴ 治疗的针对性强，疗效可靠。 ⑵ 药理活性高 高活性物质。
⑶ 毒副作用小，营养价值高 。蛋白质、核酸、 糖类、脂类等无害，还有营养作用。
⑷ 生理副作用常有发生。 不同生物，甚至相同生物不同个体之间的活性物质
有结果差异易引起免疫反应（重复给药易产生抗体）、 过敏反应 2、在生产的制备中特殊性
提取纯化工艺复杂/稳定性差/易变质腐败/注射用药要求 3.检验的特殊性
理化性质/生物活性/安全性检验指标 4、剂型要求的特殊性
易被人体胃肠道环境变性/酶解/给药途径会直接影响其疗效发挥。 2.基因载体，基因文库
需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。
将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶，将DNA切成一定范围大小的DNA片段，然后将这些片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中，每个受体菌都含有了一段不同的DNA片段。这个群体包含了这种生物的所有基因，称为基因文库
.基因文库包括基因阿组文库.部分基因文库（如:cDNA文库）
3.抗体制药，抗体概念；单克隆抗体，双克隆抗体，双功能抗体，双链特异性抗体
抗体：指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。它是机体免疫系统受抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白
免疫球蛋白（Ig）是化学结构上的概念，抗体是生物学功能上的概念 所有抗体均是Ig，但并非所有Ig分子都具有抗体活性
单克隆抗体（简称单抗）是针对特异抗原产生的特异纯化抗体，它具体有高度专一性，能精确地瞄准、捕获目标靶点，特异性地与靶目标发生反应，因而有“生物导弹”之称。单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。
由于这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又是由单一的B淋巴细胞克隆产生的，所以称为单克隆抗体
给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物，它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的， 称为多克隆抗体。
双特异性抗体(bispecific antibody,BSAb)是指能同时识别2种抗原的抗体。1种为对应肿瘤相关抗原。另1种为对应效应成分。
双功能抗体就是双特异性单链抗体（ bispecific single-chainFvs, bisFvs） 非天然抗体，结合抗原的两个臂且具有不同的特异性。
将抗Ａ抗原抗体的轻链可变区基因(VLA)与抗Ｂ抗原抗体的重链可变区(VHB)通过短肽连接子连接构成双链抗体的表达质粒，表达后形成双特异性抗体，绝大多数是在大肠杆菌中以分泌形式表达的。
4.CDR互补决定区概念
互补决定区（ complementary determining region, CDR）:V区某些特定氨基酸残基显示更大的变异性，构建了抗体分子和抗原分子发生特异性结合的关键部位。H和L链各有三个CDR，其他部分称为框架区 二． 简答
1. 生物制药产业化的特点
四高一长：即高技术，高投入，高风险，高回报，长周期 2. 获取目的基因的六种方法 ①从基因文库中获取
（基因组文库，部分基因文库） ②利用PCR技术扩增目的基因 （变性，复性，延伸）
③通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成 3. 聚合酶链式反应的条件和步骤
① 概念：PCR全称为聚合酶的链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术
③条件:已知基因的核苷酸序列, 四种脱氧核苷酸, 一对引物,DNA聚合酶 过程: 变性、退火、延伸三步曲 4. 单克隆抗体的特性
高度均一性： 纯度很高的均一性抗体 高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应.大量产生及稳定性：杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代 5. 基因克隆【单键链抗体】的优点
（1）分子小,（2）易于进行分子改造（3）体内半衰期短，免疫性低 6. 单克隆抗体的制备即单克隆抗体的定义
单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。 7. 基因文库中目的基因提取方法的优缺点 鸟枪法 优点：操作简便广泛使用。缺点：工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因
反转录法 优点：专一性较强,缺点： 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高
根据已知氨基酸合成DNA法;优点：专一性最高, 缺点：仅限于合成核苷酸对较少的简单基因
8. 基因工程药物的特点
①它将外源DNA的新组合引入到新的宿主生物中进行繁殖, 克服了生物种间的限制, 为 定向创造新生物带来了可能.
② 能够使一种确定的DNA小片段在新的宿主生物中扩增, 仅仅将需要的DNA片段转入到宿主细胞中, 避免了一些无用的、或有害的遗传信息进入宿主细胞. 9.工程菌构建中重要的工具及作用
基因的剪刀-----限制性核酸内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运输工
具——载体
10.病毒载体与非病毒载体的优缺点
优点：技术最为成熟、运用最广，基因转染效率较高，能使治疗基因高水平的导入和表达(90％)；目前已有产品上市。
缺点：安全性问题如致瘤性与免疫原性，DNA装载量有限，载体组装难度大，花费高等。
.非病毒载体的优缺点
优点：低免疫原性、外源基因不会整合入宿主细胞的染色体中，也无插入突变的危险，其 安全性较高。
缺点：转染效率低、靶向困难、目的基因有效表达时间较短。
降低现存非病毒载体的毒性、同时提高其基因转染效率是目前研究的方向。
三． 判断 1．动物细胞培养基为了防止其染菌常加入青霉素【抗革兰氏阳性菌】链霉素【康革兰氏阴性菌】
2．并非所有免疫球蛋白均具活性，但抗体均是免疫球蛋白 3.双功能抗体是非天然抗体，结核抗原的两个壁 4. 糖蛋白类生物药物的表达产物 四．论述
1.鼠原性单抗药物缺点的改造方向
缺点：1.单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内有排斥反应；
2.完整抗体分子的相对分子量过大，难以穿透肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。
两个方向：1.降低单克隆抗体的免疫原性；2.降低单克隆抗体的相对分子量。 2．如何利用基因工程抗体进行改造
根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括 嵌合抗体、改形抗体 、小分子抗体等。
嵌合抗体是用人抗体的C 区替代鼠的C 区, 使鼠源性单抗的免疫原性明显减弱, 并可延长其在体内的半衰期及改善药物的动力学, 属第一代人源化抗体(humanized antibody , HAb) 。其可变区仍保留鼠源性序列( ～30 %) , 可引起不同程度的HAMA , 有些仍可引起抗独特型抗体的产生, 而且对肿瘤组织的穿透能力较差, 清除也较慢, 因而在导向诊断和治疗等方面的应用受到一定限制。 改型抗体：用鼠源性单克隆抗体的CDR序列替换人Ig分子中的CDR序列，可使人的Ig分子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合的特异性。抗体分子中鼠源部分只占很小比例，可基本消除免疫原性。最大问题是抗体的亲和力下降，甚至丧失活性。 小分子抗体
Fab（fragment of antigen binding）：抗原结合片段。由重链的V区及CH1功能区与整个的轻链以二硫键形式连接而成，主要发挥抗体的抗原结合功能。由于仍保持抗体分子的立体构型，在人体很稳定，称Fab抗体 。
Fv抗体，有重链和轻链的可变区组成，由于具有与完整抗体相似的结合能力，因此命名为“抗体可变区片段”，称Fv抗体。 1.基因工程药物生产的基本过程
①目的基因的克隆---分离出带有目的基因的DNA片段
②构建DAN重组体---DNA片段与载体DNA连接, 形成重组DNA分子 ③构建工程菌（细胞）---将重组DNA分子引入宿主细胞
④目的基因的表达---筛选出获得了重组DNA分子的宿主细胞克隆, 大量繁殖表达
⑤产物的分离纯化 ⑥产品的检验 2.载体的功能
①运送外源基因高效转入受体细胞
②为外源基因提供复制能力或整合能力
③为外源基因的扩增或表达提供必要的条件 3.理想基因工程对载体的要求 ? 含有复制子。这是一段具有特殊结构的DNA序列，载体有复制起始位点，才能携带外源基因进入宿主后，进行复制，保证子代细胞仍含有外源基因。
? 有一个或多个利于检测的遗传表型，易于识别和筛选。如抗药性、显色表型、营养缺陷型、荧光表型等。
? 有一个或几个限制性酶切酶的单一识别位点，便于外源基因的插入，但不影响载体自身DNA的复制。
? 适当的拷贝数。高拷贝数不仅利于载体的制备，也有利于克隆基因的剂量的增加。
? 容易从宿主细胞中分离纯化。
4.质粒：是存在于染色体外能独立复制，稳定遗传的一种环状双链DNA分子 5基因表达检测分为两个水平，即：转录水平上对特异mRNA的检测,翻译水平上对特异蛋白质的检测 6.基因表达
基因表达分为转录及翻译两阶段
转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程
翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程,检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。 7.生物技术包括哪些,关系如何? 基因工程技术-----核心 细胞工程-----基础 酶工程----条件 发酵工程-----手段 8.生物技术的优越性
(1)不可取代性(2)快速准确(3)低耗,高效(4)副产物少,安全性高,副作用少
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