制备固定化酵母细胞

制备固定化酵母细胞 （教案）

常州市新桥中学 张琴娣

一、教学目标

1、比较直接使用酶、固定化酶和固定化细胞的优点和缺点。

2、尝试制备固定化酵母细胞，并了解利用固定化酵母细胞进行酒精发酵。 3、能运用该部分内容解决一些实际问题。 二、教学重点与难点 制备固定化酵母细胞

三、导入新课 反馈练习1、2、3题，强调实验的重要性 四、知识回顾

1、列表比较直接使用酶、使用固定化酶和使用固定化细胞催化反应，各有哪些优点和缺点，并各举一例。

2、固定化酶和固定化细胞技术利用的方法有哪些？

3、固定化细胞常用的方法是哪一种？为什么？

4、催化大分子物质反应，应该采用固定化酶的方法还是固定化细胞的方法？为什么？

五、实验操作步骤 1、酵母细胞的活化

称取1g干酵母，放入50ml的小烧杯中，加入蒸馏水10ml，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右，使其活化（问：什么是活化？活化后酵母细胞的体积会变 ）

2、配制0.05mol/L的CaCl2溶液

（问：为什么要配制CaCl2溶液？答： ） 称取无水CaCl20.83g，放入200ml的烧杯中，加入150ml蒸馏水，使其充分溶解，待用。 3、配制海藻酸钠溶液 （该实验成败的关键步骤）

称取0．7g海藻酸钠,放入50ml小烧杯中，加入10ml水，用酒精灯加热，边加热边搅拌,将海藻酸钠调成糊状,直至完全溶化,用蒸馏水定容至10ml。注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止。

（问：为什么要小火或者间断叫热？ 海藻酸钠浓度不能太高，也不能太低。原因是：太高 ，太低 ） 4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合

1

将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的酵母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。（为什么要冷却？ ） 5、固定化酵母细胞

以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30分钟。

（为什么要浸泡30分钟？ ） 五、反馈练习 （见学案） 六、教学反思

1、学生的实验结果并不理想，凝胶珠基本上都带尾巴，可能是海藻酸钠浓度太高或太低。而学生配的海藻酸钠浓度普遍太低，说明蒸馏水加得太多，做得较好的同学，加10ml蒸馏水溶解海藻酸钠后，再加3—5ml。每次买的海藻酸钠批次不同，需要加的蒸馏水的量也不同，所以在学生实验前老师都要预先做一遍。

2、学生在溶解海藻酸钠时加了蒸馏水还没充分搅拌就加热，所以出现海藻酸钠有的形成硬块没有溶化的现象，今后实验过程中要加强这方面的指导。 3、用高考题引入，效果较好，强调实验的重要性很有说服力。

2009-6-12

制备固定化酵母细胞 （学案）

班级 姓名

一、学习目标

1、比较直接使用酶、固定化酶和固定化细胞的优点和缺点。

2、尝试制备固定化酵母细胞，并了解利用固定化酵母细胞进行酒精发酵。 3、能运用该部分内容解决一些实际问题。

二、学习重点与难点 制备固定化酵母细胞 三、知识回顾

1、列表比较直接使用酶、使用固定化酶和使用固定化细胞催化反应，各有哪些优点和缺点，并各举一例。

2、固定化酶和固定化细胞技术利用的方法有哪些？

3、固定化细胞常用的方法是哪一种？为什么？

4、催化大分子物质反应，应该采用固定化酶的方法还是固定化细胞的方法？为什么？

四、实验操作步骤

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1、酵母细胞的活化

称取1g干酵母，放入50ml的小烧杯中，加入蒸馏水10ml，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右，使其活化（问：什么是活化？活化后酵母细胞的体积会变 ）

2、配制0.05mol/L的CaCl2溶液

（问：为什么要配制CaCl2溶液？答： ） 称取无水CaCl20.83g，放入200ml的烧杯中，加入150ml蒸馏水，使其充分溶解，待用。 3、配制海藻酸钠溶液 （该实验成败的关键步骤）

称取0．7g海藻酸钠,放入50ml小烧杯中，加入10ml水，用酒精灯加热，边加热边搅拌,将海藻酸钠调成糊状,直至完全溶化,用蒸馏水定容至10ml。注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止。

（问：为什么要小火或者间断叫热？ 海藻酸钠浓度不能太高，也不能太低。原因是：太高 ，太低 ） 4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合

将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的酵母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。（为什么要冷却？ ） 5、固定化酵母细胞

以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30分钟。

（为什么要浸泡30分钟？ ）

五、反馈练习

1．下列有关实验及显色结果的叙述，错误的有（多选）

A．水浴加热条件下，蔗糖与斐林试剂发生作用生成砖红色沉淀 B．沸水浴条件下，脱氧核苷酸与二苯胺发生作用呈现蓝色 C．常温条件下，蛋白质与双缩脲试剂发生作用呈现紫色 D．常温条件下，核糖核酸与甲基绿作用呈现绿色

2．下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述，正确的有(多选) A．提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞

B．用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质 C．蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNA D．蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化

3．下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是 （单选） A．固定化细胞技术在多步连续催化反应方面优势明显 B．固定化酶的应用中，要控制好pH、温度和溶解氧

C．利用固定化酶降解水体中有机磷农药，需提供适宜的营养条件 D．利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物

4、为提高葡萄酒的品质并降低生产成本，许多厂家使用固定化酵母细胞进行发酵。下面是

制备固定化酵母细胞的实验过程：

A．将干酵母与蒸馏水混合并搅拌，使酵母菌活化 B．将无水氯化钙溶解在蒸馏水中，配成氯化钙溶液 C．用酒精灯大火连续加热海藻酸钠溶液

D．向溶化后冷却至室温的海藻酸钠溶液中加入已活化的酵母细胞，充分搅拌并混合均匀转

3

入注射器

E．将与酵母混匀的海藻酸钠溶液注入蒸馏水中，观察凝胶珠形成

请你改正其中错误的操作：

5、酵母菌与人们的日常生活密切相关，也是现代生物技术研究常用的模式生物，生物兴趣小组对酵母细胞的固定化进行了究。请你根据他们的研究内容回答问题：

⑴ 在制备固定化酵母细胞过程中，溶化好的海藻酸钠溶液要冷却至室温，才能加入已活化

的酵母菌，原因是 。 ⑵ 如果在CaCl2溶液中形成的凝胶珠颜色过浅，说明 。 ⑶ 本实验所用的固定化技术是包埋法，而制备固定化酶则不宜用此方法，原因是 。 ⑷ 利用固定化酵母细胞进行酒精发酵，与直接接种酵母菌相比较有哪些优点？（说出两点） 。

六、对本实验你还有的疑问、建议或反思

七、课后作业

1、生产果胶酶是食品加工业中使用量最大的酶制剂之一，若通过固定化酵母菌细胞生产果胶酶，在配置海藻酸钠溶液时，要注意 ，否则可能出现焦糊。

2、上个世纪50年代，酶已经大规模地应用于各个生产领域，到了70年代又发明了固定化酶与固定化细胞技术。在实际生产中，固定化酶技术的优点是 。 固化细胞固定的是 酶。在制备固定化酵母细胞的实验中，常用的包埋材料是 。

3、某研究性学习小组的同学用适宜浓度的海藻酸钠溶液将活化的酵母细胞固定化后发酵无菌麦芽汁制酒，发酵条件符合操作要求。10天后检查发酵液发现麦芽汁几乎无酒味，发酵失败最可能的原因是 。 4、某科研人员用海藻酸钠作为包埋剂来固定碱性蛋白酶，以研究固定化酶的性质，并对其最佳固定条件进行了探究。下图显示的是部分研究结果（注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量），分析回答： （1）甲图显示当海藻酸钠浓度较低时，酶活力较低原因是

酶活力酶活力 4

甲 海藻酸钠浓度/% 乙 使用次数