[专题]肿瘤模型专区9-12

【专题】肿瘤模型专区（9-12页）

多发肿瘤模型 medsky1982：

我的实验要求经脾脏注射大鼠肝癌细胞,建立肝内多发肿瘤模型,查看国内的大鼠肝癌细胞株有：CBRH-7919,RH-35,Walker256,但是他们在经脾脏注射建模中的特性不清楚，最好是能有高的转移成瘤能力，又不易产生腹水。 Swordzjsh

不知道你们的试验目的是什么，但是我们一般不会考虑去建立直接多发的肿瘤模型，除非是转移模型，因为多发的肿瘤不好进行评价，单个的肿瘤灶可以量大小，可以剥出来称重，而且在造模的时候也比较好控制，所以很少去留意多发肿瘤模型的资料。 开腹手术 medsky1982

1.另外想请教一下你们在做大鼠开腹手术（时间2小时左右）时，一般要不要经颈外静脉生理盐水补液？2.你们开腹肝内原位种植肿瘤手术后的护理应该注意什么，比方饮食，抗感染之类？ Swordzjsh

1. 不知道，我从来没有构建原位模型开腹这么久的。开腹后几分钟就关腹了 2. 没有什么特别需要注意的，就是小心缝线打结要结实，否则第二天你会发现几只线破肠流的尸体。

裸鼠造模周龄 Futingtingftt

我得实验是准备造乙型肝炎动物模型，用HepG2.2.15细胞皮下或者腹腔接种裸鼠成瘤，大家都说裸鼠最好是5－6周龄的，可是我想问问各位高手，有没有4周龄接种成功的呢？4周造模成功率怎么样？我想买4周龄的裸鼠，如果细胞很好的话就可以直接接种，不好的话就是裸鼠再长2周也可以用 Swordzjsh

一般建议用5~7周龄的，4周龄太小，至少4周半吧。其实有时候8周龄也凑活能用。

复苏瘤块接种： Tumin

我做兔vx2肿瘤模型.现在只有冻存的vx2瘤块,问是否可以直接复苏后注射到兔肌肉内制成荷瘤兔?

Swordzjsh可以的，但是建议也要在体内穿三代，而且接种的时候要几块组织接到一个位点，因为刚复苏的瘤块活力比较差。

nude_mice:

按照我们平时的经验，总是说肿瘤细胞要先在动物体内传几代，才能正式实验。新的抗肿瘤药物指导原则上也强调要3代以上才能用。可是，不知道大家注意没有，国外的文献中，动物模型大多是用肿瘤细胞直接接种动物，第一代就正式实验了。不知道大家对这个有什么想法？

swordzjsh

关于这一点，有两种理解： 一种说法是：国外的文献一般不是以药效为主要目标，而且说明机制功能之类的东西，他们对于这一类的试验，只要求试验有一个平行性就可以了，不强求严格的要求。

还有一种理解是：国外，特别是美国的肿瘤模型的构建方法和国内不一样，他们是用体内的肿瘤组织分散成细胞后体外培养冻存，在五代之内接种至动物体内做试验。这样的接种方式，在描述上看起来就像细胞直接接种一样。

雌激素和Matrigel

nude_mice wrote:

我最近要做MCF-7细胞ER(+)移植瘤，我想请问swordzjsh，你在做的人乳腺癌细胞移植的时候，是否需要雌激素的支持？

我看了一些文献，很多写到需要皮下包埋雌二醇。目前应用较多的是雌激素制剂为17β-雌二醇（17β-Estradiol）缓释片剂，为Innovative Research公司生产，有0.18、0.36、0.72和1.7mg等多种型号，60天和90天两种释放周期，以0.72mg/60天缓释片剂应用较多，于实验前进行裸鼠皮下包埋即可。另一种雌激素制剂是环丙戊酸雌二醇（Estradiol Cypionate）注射液，维持时间1周，使用的剂量为1.5mg/kg。 swordzjsh

雌激素我们以前也想找这个缓释丸，但是国内没有卖的，就算有，价格也很贵，一粒就是十几美金，每只老鼠来一粒......自己算算吧，国内现在都是用雌二醇的油剂注射，很痛苦，但是也没有办法。

nude_mice: 想买Matrigel，但BD公司的人跟我说Matrigel打开只能做一次就失效了。但我就做一个预试验，即使买他们最小包装的话，都有点浪费了，因为需要2000多元人民币。 swordzjsh

关于matrigel，我看过一些文献，但是具体你说的这个开包就不能用的细节我不是很清楚，但是，我想应该是开包后最为基底膜的基质效果就不好了，而作动物试验应该问题不大吧，要是开包就不能用作动物试验了，你们就不买了，多半他会说实话。 nude_mice wrote:

价格倒是其次，关键是能成功建立模型，花费再大也是值得的。 这个乳腺癌模型存在的技术要点，可能就在于雌激素支持和基质胶这两个方面了。国内倒是有很多成功的报道，包括本版块中也有，但都没有谈到

这些东西。说实话，据我了解，上海这边很多资深的研究机构都没有做出来。

swordzjsh

不知道你们有没有选择其他瘤株的余地？实际上，我以前构建MCF-7的时候，干脆就是用雌性裸鼠，没有用雌激素，也没有用matrigel，也能长出来，但是特别的慢，我和其他单位的老师也交流过，他们的经验是MCF-7和用雌激素的效果不明显。

皮丘, 破溃

lizhuo721:

我做的是人绒毛膜癌裸鼠模型。1周前接种JAR细胞悬液，选取左侧腋窝皮下注射，细胞数为5*10~6/只/0.2ml，过程很顺利。其后隔日观察，见皮丘渐小。今天是接种后第8天，发现皮丘变成了青紫色，较前也有不同程度的增大。瘤体变成青紫色是不是破溃前兆啊？

swordzjsh

一般来说，要溃破有两种情况，一种是污染溃破，应该是发黄，还有一种是长得太大溃破，应该是红到发黑，不过你才接种了没有几天，应该不会出现后一种情况。青紫色，而且还会增大，可能是这个瘤株长成后就是这个颜色，多注意观察吧。

计数, 传代, 同源瘤株

一草:

我想请教一下有用SD大鼠做原位肝癌模型的吗？

在传代老鼠腹腔抽取的癌性腹水需要计数或其它处理吗？

如再传代是直接抽１ml注入到幼鼠腹腔吗？术后老鼠需要肌注青霉素吗？如果术前打两天免疫抑制剂是否更容易成瘤呢？但同时是否也容易感染至死呢？

swordzjsh

一般很少用大鼠作肿瘤模型，：

1. 计数问题，对这个瘤株不熟悉的话，还是应该计数，而且要用台盘兰计活细胞数。

2. 一般最好稀释后传代，这样不容易血性，但是具体的稀释比例，你通过文献和自己摸索来定吧，一般1：3~10用的比较多。 3.不要打青霉素，完全没有必要。

4.如果是同源瘤株，完全不需要免疫抑制剂，同源瘤株的意思是这个瘤株就是相应的大鼠瘤株，而不是小鼠或者人的肿瘤，也不是其他品系大鼠的瘤株。如果你用的不是同源瘤株，建议你更换瘤株或者动物。

注射器选择 zengqq727

我现在在做骨肉瘤动物模型,可是细胞株应该怎么注入胫骨骨髓腔呢? 可不可以用骨钻呢还是用腰穿针呢? sky2345

我试过，用20ml注射器的针头穿孔，再用折弯的注射器针头伸入髓腔内注射 但我用的是1ml的注射器，很难将细胞悬液注入而不满出来。

肿瘤倍增时间

gold wrote:

肿瘤倍增时间怎么计算？

在做肿瘤动物实验模型，想知道肿瘤的倍增时间（doubling time），应该是在瘤体积100－800之间计算，但是一组动物有10只，每周测量2次瘤体积，如果我想计算从200倍增到400的时间的话，10只动物不会在我测量体积的时候正好到200或400，那么，在计算的时候，具体应该怎么做呐？

swordzjsh

Geddes 等[29]将结节倍增时间的计算公式表示为：DT =（ln 2△ t）/ln（V2/V1），V1、V2分别是前后两次测量的体积，△ t是两次测量的时间间隔

你的问题有歧义，我觉得可以有几下几种理解：

1.测量的时候，对于某个老鼠来说，第一次可能测出来的体积是189.26（不是正好200），第二次是415.31（不是正好400），对于其他的动物都有这样的问题， 2.对于十只老鼠来说，测量的时候，可能1号老鼠是189.26，2号是312.57，3号是110.89......，这也是一种理解，我的意见是：测量一段比较长的时间，每只老鼠可以独立计算倍增时间，然后计算平均值，SD等，用统计学处理的手段。 个体差异 mrpanh:

同一批接种几十只老鼠，有的就长不出来，有的长得很大，使评价药效很困难。排除接种悬液未摇匀的可能后，还有什么原因可能造成这一点？ nude_mice

只能说是个体差异了。

其中，老鼠年龄是一个很大的因素。本人就遇到过2个月的老鼠接种肿瘤以后，有的长有的不长的情况。如果控制好试验条件，动物也比较均一的话，一般肿瘤生长都会很好的控制在一定范围的。这点，做多了就有感觉了。