Lipofectamine 2000转染说明 

LipofectamineTM 2000

CAT. NO. 11668-027 Size: 0.75ml CAT. NO. 11668-019 Size: 1.5 ml

4℃储存（不要冻存） 说明：

LipofectaminTM 2000是核酸（DNA或RNA）转染真核细胞的一个专用的试剂盒，其有如下优点：

? 对各种细胞及细胞板（如96孔板）都有高的转染效率，在www.invitrogen.com 的细胞

系数据库中有各种细胞转染成功的实例。

? 在含有或是不含有血清的培养基中，DNA- LipofectaminTM 2000复合物能够直接加给细

胞。

? 在转染之后不需要除去复合物以及添加或是更换培养液，但在培养4-6小时后需要除去

复合物。

关于转染的一些重要建议：

1. 不要用即将要介绍的转染程序进行RNAi的转染实验。在www.invitrogen.com/rnai上有转染步骤，登陆后点击说明。

2. 对于大多数细胞系，转染复合物中DNA(μg)与LipofectamineTM 2000(μl)的比例

在1：2到1：3之间，最好达到最优化的比例。注意：在混合之前，我们建议用Opti-MEM I 低血清培养基（Cat: NO.31985-062）（reduced serum medium）稀释LipofectamineTM 2000和DNA. 3. 为了实现高的转染效率、高的目的基因表达水平以及低水平细胞毒效应，受体细胞

最好达到高的浓度：在转染时，细胞的培养液的混浊度建议为90%-95%并最优化混浊度。此外，在实验过程中保证相同的接种条件。 4. 为避免细胞死亡，在培养基中不要加抗生素。

5. 由于一些无血清复合物（如CD239、SFM II、VP-SFM）会抑制阳离子脂质体介导

的转染，因此有必要检测一下无血清培养基和LipofectamineTM 2000的相容性。

转染步骤（用于DNA）：

按照如下步骤在24孔板中转染哺乳动物细胞。对于其它种类细胞板请参照转染量度标准。步骤中均按照一个细胞孔的量给出质量和体积。

5

1. 贴壁细胞：转染的前一天，在500μl无抗生素培养基中接种0.5-2×10个细胞，以保

证在转染时候细胞的混浊度达到90%-95%。

悬浮细胞：在准备转染混合物时，每500μl无抗生素培养基中含有细胞数量为4-8×5

10。

2. 对于每个转染样品，按下面的方法准备：

a、 在50μl无血清Opti-MEM I 低血清培养基中（或是其它无血清培养基）稀释DNA，

并轻轻混匀。

b、 使用前轻轻混匀LipofectamineTM 2000，然后取相应的量稀释在Opti-MEM 培养基中。

室温下静置5分钟。注意：要在30分钟内混合LipofectamineTM 2000和DNA的稀释液。

c、 室温下静置5分钟后，混合LipofectamineTM 2000和DNA的稀释液（总体积为

100μl）。轻轻混匀并在室温下静置20分钟（溶液混合后可能会看上去浑浊）。注

意：混合物在室温下的6个小时内不会失效。

3. 细胞板的每个孔中加混合液100μl，并前后轻轻摇动细胞板使混合液与孔中的培养液

混匀。

4. 检测目的基因的表达情况前，细胞于37℃ CO2培养箱中培养18-48小时。此时不需要

改变培养基，但4-6小时后也许需要更换.

5. 对于固定的细胞系：转染24小时后将细胞以1：10（或更高的稀释度）稀释度转移到

新鲜的生长培养基中。如果需要的话，在以后的培养中可以在培养基中加入选择培养基。 对于悬浮的细胞系：转染4小时后，如果需要，加入PMA和/或PHA以提高CVM启动子的活性并促进基因表达。

转染量度标准：

在不同的组织培养板中转染细胞时，根据相对的表面积，按比例加入LipofectamineTM 2000、细胞、和培养基，具体情况剪下表。在自动、高产率体系中，建议96孔板的转染混合物的体积为50μl。注意:操作时，可以直接将细胞混入转染混合物中进行快速的96孔板转染。在细胞板中准备好转染混合物，然后直接加入说明中正常100μl体积时浓度的2倍浓度细胞培养液。在转染混合液存在情况下，细胞可以正常的贴壁。 培养容器 96孔板 24孔板 12孔板 35mm板 6孔板 60 mm板 10cm板 每个孔的表2面积（cm） 0.3 2 4 10 10 20 60 相对于24孔板的表面积 0.2 1 2 5 5 10 30 铺板培养基体积 100μl 500μl 1ml 2ml 2ml 5ml 15ml DNA(μg)/培养基（μl） 0.2μg/25μl 0.8μg/50μl 1.6μg/100μl 4.0μg/250μl 4.0μg/250μl 8.0μg/0.5ml 24μg/1.5ml LipofectamineTM 2000（μl）/培养基（μl） 0.5μl/25μl 2.0μl/50μl 1.0μl/100μl 10μl/250μl 10μl/250μl 20μl/0.5ml 60μl/1.5ml 注意：表面积是根据培养容器的实际测量得到，但也会根据容器生产商的不同发生变化。

优化转染：

为了得到高的转染效率和低的无用副效应，通过改变细胞浓度、DNA以及LipofectamineTM 2000的浓度来优化转染条件。另外，要保证细胞培养基的细胞混浊度高于90%，DNA(μg)与LipofectamineTM（μl ）2000的比例在1：0.5到1：5之间。