苦豆子总碱及4种单体生物碱对幽门螺杆菌的体外抑菌作用研究

苦豆子总碱及4种单体生物碱对幽门螺杆菌

的体外抑菌作用研究

【摘要】 目的 探讨苦豆子总碱、苦参碱、苦参素、槐定碱、槐果碱体外抑制幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）的作用。方式选用5种苦豆子生物碱，纸片扩散法粗测抑菌浓度范围；依据粗测范围，液体倍比稀释法测定5种生物碱的最小抑菌浓度(MIC)。结果苦豆子总碱的MIC为32 mg/ml，在体外对Hp有必然的抑制作用。苦参碱、苦参素的MIC为64 mg/ml，槐定碱的MIC为128 mg/ml，体外抑菌活性微弱。槐果碱在体外对Hp无明显抑制作用。结论苦豆子总碱有可能成为替代抗生素的抗Hp候选药物。

【关键词】 幽门螺杆菌； 苦豆子总碱； 苦参碱； 苦参素； 槐定碱； 槐果碱

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染是慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤、胃腺癌的要紧病因［1］。肃除Hp已成为现代医治Hp相关性胃肠疾病的重要方法。最近几年来，由于甲硝唑、阿莫西林等抗菌药物的普遍应用，使得Hp的耐药日趋严峻［2］。因此，寻觅新型抗Hp药物取代或辅助抗生素进行Hp肃除医治，减少耐药菌株发生，有重要的临床意义。苦豆子 Sophora alopecuroides. L.属豆科槐属植物，具有清热解毒、抗菌消炎作用，民间用其医治胃痛、腹泻等症。苦豆子类生物碱是从苦豆子

的干燥全草和种子中提取的生物碱。有研究报导，苦豆子类生物碱对大肠杆菌、痢疾杆菌、结核杆菌、金黄色葡萄球菌等具有良好的抗菌作用［3］。本研究从文献报导中遴选了5种抗菌作用明显的生物碱，进行了抗Hp作用的体外实验研究，以期发觉有效的非抗生素类抗Hp药物。

1 材料

材料苦豆子总碱(Total alkaloids of sophora alopecuroides，TASA，批号：)、苦参碱(matrine，批号：)、苦参素(oxymatrine，批号：)、槐定碱(sophoridine，批号：)、槐果碱(sophocarpine，批号：)均购自宁夏紫荆花药业公司。

试剂BBLTM Columbia Agar Base（Becton,Dickinson and Company，REF 211124，批号：7184335)；布氏肉汤(青岛高科园海博生物技术，批号：)；无支原体新生牛血清(杭州四季青生物工程材料，批号：080816)；万古霉素(上海生工，批号：V0990)；两性霉素B(上海生工，批号：A0414)；多粘菌素(Sigma公司，批号：81334)；TMP(BIO BASIC INC，批号：T714208)。

菌株 Hp标准菌株NCTC11637购自中国疾病预防操纵中心传染病预防操纵所；用于分离Hp的胃黏膜样本采自兰州大学第一医院胃

镜室。

培育基哥伦比亚固体培育基：Columbia Agar Base g，三蒸水100 ml，万古霉素250 mg/L，两性霉素B 200 mg/ L，多粘菌素220 mg/L，TMP 300 mg/ L，脱纤维羊血5 ml，10%葡萄糖5 ml；液体培育基：布氏肉汤粉 g，新生牛血清2 ml，10%的葡萄糖1 ml，淀粉。

仪器

幽门螺杆菌厌氧培育罐(HP015，广州海太光电生物科技)；SW-CJ-2F型干净工作台（苏州净化设备）；BMC-1300ⅡA/B3型生物干净平安柜（苏州净化设备）；光学显微镜（OLYMPUS）；分析天平（上海光学仪器厂）。

2 方式

Hp的分离培育于慢性浅表性胃炎、胃溃疡患者胃窦部用灭菌活检钳钳取活组织1块（标本搜集前作快速尿素酶实验，“++”以上者取材），划线接种于哥伦比亚培育基，微需氧条件（85%N2，10%CO2和5%O2），温度37℃，湿度95%培育3～5 d。菌落通过形态学鉴定和生化鉴定进行判定。刮取培育的阳性菌落并苏醒冻存的Hp标准菌株，固体增菌培育48 h，转种于液体培育基，置于振荡培育箱中，于85%N2，