考生編號_______________ 分數________________
二００五年國際生物奧林匹亞國手選拔營實作試題
第A試場
實驗所需要的器材及藥品，都已放在桌上，請按照下面的清單清點。若有缺少請舉手告訴評審老師。實驗完畢後，請將用過的器材清洗乾淨並放置整齊。
A.實驗器材：
器 材 類 油性筆 微量分注器P1000 微量分注器P100 微量分注器P10 1支 1支 1支 1支 藥品及材料類 細胞 1管 Chelex，10％ 600uL 1管 7.5 mM NH4OAc，200uL 1管 -20℃ 預冷之100%酒精，400uL 1管 1管 1管 1管 1盒 1盒 1盒 1杯 1把 微量離心管 1盒 -20℃ 預冷之70%酒精，1mL 微量試管架 1個 Glycogen (5mg/mL)，5uL 浮板 1個 無菌水， 1mL 廢棄物收集杯 1個 藍色吸管尖 光電比色機（測DNA，共用） 3台 黃色吸管尖 水浴槽（100℃，共用） 4 組 白色吸管尖 微量離心機（37℃，共用） 4台 碎冰 剪刀 1把 夾子
※ 請注意：
1. 桌上的藥品及器材用完後，將不再補充。
2. 本試卷（含封面、試題卷）共3頁，於交卷時全部繳回。
3. 作答時間60分鐘，請於本卷上作答。試題答案可寫至題目背面，但請註明並標上題號。
4. 請於本頁左上角「考生編號」處，填入個人編號。
B.試題：
一、實作題：
a. 萃取口腔DNA (40分)
助教已經完成步驟1至5請由步驟6開始做你的實驗
1. 使用油性筆在無菌的15 mL培養試管(藍色蓋子)之一側做標記，內含 10 mL無菌之生理食鹽水。每人抽取自己的口腔DNA。
2. 將10 mL無菌之生理食鹽水全部倒入口中，並且劇烈漱口10 秒，保留試管待下一步驟使用。
3. 將口中之溶液吐到紙杯中，再小心的倒回試管中並鎖緊蓋子。
4. 將試管離心10分鐘，以便在底部形成細胞沈澱，離心機由監考老師操作，並在離心完成後幫你們拿回來。
5. 拿回試管後小心不要搖動到沉澱，並將上清液儘量倒掉，將含有沉澱之試管置冰浴中。
6. 以微量吸管加500 uL 10%之Chelex於試管中：
a.以剪刀剪去微量吸管頭前端2~3 mm。
b.以微量吸管在Chelex溶液中吸放數次，以使Chelex顆粒懸浮。 c.在Chelex沈降前，吸500 uL溶液到培養試管中。
7. 在試管中以微量吸管吸放數次，以使細胞懸浮於Chelex，並將試管置於光線下檢查，看是否還有細胞塊殘留。
8. 將溶液全部移到一個乾淨的1.5 mL反應試管中，並做好標記。
9. 將反應試管置於沸水中水浴10分鐘。
10. 水浴後，小心的將試管以夾子取出，並置於冰浴中1分鐘（也可以更久）。 11. 將試管放入微量離心機中，離心 10000 RPM 30 秒，以便將Chelex顆粒形成沉澱。
12. 吸取200 uL上清液到一新的1.5 mL試管中，並做好標記；要避免吸到沉澱，之後將試管置於冰浴。
13. 於DNA 樣品中加入0.5倍體積之7.5 mM NH4OAc及2倍體積-20℃預冷之100%酒精，並加入1ul之Glycogen幫助沉澱。混合均勻後離心。 14. 以1,4000RPM離心10分鐘，此時可看見白色之DNA沉澱物。
15. 去除上層液後加入500ul -20℃ 預冷之70%酒精，些微振盪後以1,4000 xg離心1分鐘。去除上層液後交給老師。
b.測定DNA濃度(20分)
16. 請你稀釋部分助教給的DNA（稀釋10倍或更多）使其體積成為100 uL，置於光電比色機測260波長的吸收光值（已知1單位A260 的DNA相當於 50 ug/mL的濃度），請你計算出你的樣品DNA的濃度。務必列出測完吸光值後的計算。
二、DNA的大小可利用瓊脂凝膠電泳法將之依大小分開於膠體中。如果我們將3位同學（H、K、L）抽取到的DNA進行瓊脂凝膠電泳分析，下圖為可能結果（M行為分子量標記含有1000、2000與3000鹼基對）請問哪一位同學抽取到的DNA品質最好？為什麼？(20分)
M H K L 樣品井(well)
三、設計一個實驗證明DNA複製時是呈現半保留的。(20分)
閱卷教授簽章
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