反相高效液相色谱法测定可乐中咖啡因的含量

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反相高效液相色谱法测定可乐中咖啡因的含量

作者：武开业

来源：《科技视界》2014年第28期

【摘 要】本文建立了用反相高效液相色谱法（HPLC）测定可乐中咖啡因的方法。可乐经前处理后，通过Diomonsil C18（2）5u色谱柱分离，以甲醇+水混合溶液为流动相进行洗脱，于286 nm 波长下紫外检测，一次进样分析仅需4min， 咖啡因在10～150ug/mL 范围内的线性关系良好， 在加标水平为50、80、100 ug /mL时，被测物的回收率为96.8%～101.8% 【关键词】反相高效液相色谱；可乐；咖啡因

咖啡因（C8H10N4O2）是从茶叶、咖啡果中提炼出来的一种甲基黄嘌呤的生物碱，化学名是1，3，7-三甲基黄嘌呤或3，7-二氢-1，3，7三甲基-1H-嘌呤-2，6-二酮，纯的咖啡因是白色而具有强烈苦味的粉状物，熔点 238°， 升华温度178°，易溶于水、乙醇、丙酮及氯仿等有机溶剂。适度地使用咖啡因有祛除疲劳、兴奋神经的作用，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。但是，大剂量或长期使用也会对人体造成损害，特别是它也有成瘾性，一旦停用会出现精神萎顿、浑身困乏疲软等各种戒断症状。

各国制定了咖啡因在饮料中的食品卫生标准，美国、加拿大、阿根廷、日本、菲律宾规定饮料中咖啡因的含量不得超过200mg/L，南斯拉夫规定不得超过120mg/L，到目前为止我国仅允许咖啡因加入到可乐型饮料中，其含量不得超过150mg/L，为了加强食品卫生监督管理，对饮料中咖啡因的含量进行测定是十分必要的。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂

Waters 1525双泵高效液相色谱仪（美国沃特斯公司）；色谱前处理柱；0.45um滤膜过滤装置（上海摩速有限责任公司）；万分之一电子分析天平（梅特勒-托利多公司）；25uL微量注射器（Australia）；KQ-50B超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；咖啡因标准品（纯度99%以上，广佛精细化工公司）；CH3OH（色谱纯）；三氯甲烷（分析纯）；无水硫酸钠（分析纯）；氯化钠（分析纯）；试剂用水为18.2MΩ二次去离子水。 1.2 色谱条件

Diomonsil C18（2）5u色谱柱（250mm×4.6mm，柱温30℃）；流动相为甲醇/水（4：1，流速1ml.min-1）；紫外检测器。