吸附法是两种主要的凝血酶原提取方法，凝血酶原经单独的钙离子激活即可得
到凝血酶。表1两种提取方法所得到的凝血酶比活性
等电点沉淀法根据蛋白质在溶液pH为其等电点的条件下溶解度最低的原理，
用1 %的醋酸将适当稀释后的血浆pH调至凝血酶原的等电点5.0?5. 5之间， 即可使凝血酶原析出。该方法虽然操作简便，成本较低，但得到的凝血酶含杂
蛋白较多，比活性低，达不到临床药物和检测试剂的纯度要求，还需要进一步
的纯化，而纯化步骤越多，酶的回收率则相应降低，不能有效的利用资源。 柠檬酸钡吸附法则根据柠檬酸钡能吸附依赖于维生素K的凝血因子这一特 性，在柠檬酸钠抗凝获得的血浆中加入氯化钡产生梓樣酸钡，凝血酶原等因子
随之沉淀分离出来，沉淀用EDTA解吸附，离心去沉淀，上清液经透析后获得凝
血酶原溶液。虽然该方法看似操作较为复杂，但得到的凝血酶纯度较高，可直
接用于检测试剂的制备，也可根据目的选择进行中度纯化，相比等电点沉淀法
其回收率更高，实际上节约了成本。
另外，无论是等电点沉淀法还是柠檬酸钡吸附法，最后含有凝血酶原的蛋
白沉淀的复溶过程是影响凝血酶得率的一个关键步骤。在梓樣酸钡吸附法中，
用EDW解吸附凝血酶原
应在冰浴中搅拌0.5 h以上，直至溶液呈现胶冻状态为
止，使凝血酶原充分溶解于缓冲液中。 【参考文献】
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