loading buffer
loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是 300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。 loading buffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液，加loading 100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解。 6×loading buffer 一般配置： 6×Loading buffer: 30mM EDTA 36%(v/v) Glycerol （甘油） 0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF （二甲苯青FF) 0.05%(w/v) Bromophenol BLUE (溴酚蓝) 5×SDS-PAGE Loading Buffer配制方法 组份浓度： 250mM Tris-HCl（pH6.8） 10％（W/V） SDS 0.5％（W/V） BPB 50％（V/V） 甘油 5％（W/V） β-巯基乙醇 配制量： 5mL 配制方法： 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。 1M Tris-HCl 1.25mL SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右
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