【答案与解析】
1．(1)热稳定DNA聚合(或Taq或耐高温的DNA聚合) (特定)引物 (2)cDNA文库(或部分基因文库) (3)作为标记基因，将含有重组质粒的农杆菌筛选出来(或鉴别和筛选含有目的基因的农杆菌细胞) 导入了(普通)Ti质粒
(4)植物组织培养 DXR基因是否插入到黄花蒿的染色体DNA上(或DXR基因是否整合到黄花蒿的染色体DNA上)
【解析】(1)延伸阶段指的是脱氧核苷酸聚合形成核苷酸链的过程，需要具有热稳定性的DNA聚合酶，所以加热至70～75 ℃就是为了达到DNA聚合酶的最适温度。除了该DNA聚合酶外，PCR扩增还需要的条件有模板DNA、特定引物和dNTP。(2)将目的基因储存在受体菌群中，这个受体菌群叫基因文库，由于是目的基因的反转录得到的cDNA，所以又叫cDNA
R
基因文库或者部分基因文库。(3)Ti质粒上的四环素抗性基因(Tet)是一种标记基因，其作用是鉴别和筛选含有目的基因的农杆菌细胞。由于有的Ti质粒没有与目的基因连接，所以在重组Ti质粒导入土壤农杆菌的过程中，可能有部分农杆菌中导入的不是重组Ti质粒，而是普通Ti质粒。(4)DXR基因成功导入黄花蒿组织细胞后，通过植物组织培养技术培育出转基因黄花蒿幼苗。DXR基因在黄花蒿组织中得以稳定遗传和表达的关键是DXR基因是否插入到黄花蒿的染色体DNA上。
2．(1)抗盐基因(目的基因)是否插入到烟草的染色体DNA上 (2)Hind Ⅲ SalⅠ
(3)否 含有目的基因的质粒抗四环素的基因被破坏 (4)再分化 分化 基因的选择性表达
【解析】(1)抗盐基因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是抗盐基因(目的基因)是否插入到烟草的染色体DNA上。(2)只用SalⅠ酶切割含有目的基因的DNA与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自身连接和反向接入；BamHⅠ会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用SalⅠ、HindⅢ两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。(3)选用SalⅠ、HindⅢ两种酶对质粒进行切割时，形成的重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏，故农杆菌中没有含有目的基因，为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入四环素。(4)愈伤组织经再分化，形成完整植株，这一过程需要再转接到分化培养基上进行培养，细胞分化的实质是基因选择性表达。
3．(1)预期蛋白质 脱氧核苷酸 (2)功能 (3)Ti质粒
(4)无菌 愈伤组织
(5)黄色炸药挥发分子(或黄色炸药)
【解析】(1)蛋白质工程的基本途径为：从预期蛋白质的功能出发，设计预期蛋白质的空间(或三维)结构，然后推测相应目的基因的脱氧核苷酸序列，最终人工合成出目的基因。(2)基因工程的目的是获得目的基因控制的性状，所以在进行转基因操作之前，需要先对该基因表达产物的功能进行鉴定。(3)农杆菌中的Ti质粒上的T－DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入Ti质粒的T－DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到拟芥蓝细胞中染色体的DNA上。(4)将转基因受体细胞培育成植株需要采用植物组织培养技术，该技术是指在无菌和人工控制的条件下，将上述拟芥蓝细胞培养在人工配制的培养基上，诱导其产生愈伤组织，再诱导其再分化形成胚状体，最终形成转基因拟芥蓝植株。(5)根据题干信息“使其能结合空
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气中微量的黄色炸药挥发分子，导致叶片产生特定颜色变化，从而有助于检测公共场所是否存在爆炸物”可知，在转基因植株附近放置黄色炸药，从个体生物学水平鉴定出目的基因成功表达的转基因植株。
4．(1)限制
(2)农杆菌转化法 抗除草剂基因和目的基因在同一个质粒上
(3)抗除草剂基因可能转移到杂草中 抗除草剂基因前没有了启动子 (4)C
【解析】(1)根据题意，Cre酶能特异性地识别loxP基因序列并在箭头处切开loxP，其功能类似于基因工程中的限制酶。(2)由于抗除草剂基因和目的基因在同一个质粒上，因此作为标记基因，可用于检测目的基因是否成功导入受体细胞。(3)抗除草剂基因留在植物体内可能转移到杂草中造成基因污染。经Cre酶处理后，抗除草剂基因前没有了启动子，抗除草剂基因在受体细胞内不再表达。(4)loxP序列是有方向性的。根据图示Cre酶处理后的结果，可知原来质粒一中这两个loxP序列一个正向，一个反向，选C。
5．(1)植物体细胞杂交 植物组织培养
(2)纤维素酶和果胶酶 促进原生质体的融合 (3)保持原生质体完整性 愈伤组织 (4)形态和数目 黑腐病菌
【解析】(1)据图可知，该流程图表示先去掉两种植物细胞的细胞壁，然后诱导原生质体融合获得杂种细胞，通过植物组织培养获得杂种植株，该过程是植物体细胞杂交。(2)植物细胞细胞壁的成分是纤维素和果胶，因此采用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁；聚乙二醇(PEG)的作用是让原生质体融合。(3)去掉细胞壁后获得的原生质体需要放在适宜浓度的甘露醇溶液中，保持原生质体的完整性，避免失水或吸水；在植物组织培养中，经过脱分化形成愈伤组织。(4)由于染色体在显微镜下能看见，因此可以制作临时装片，观察染色体的形态和数目，以确定是否发生染色体变异；对杂种植株进行鉴定最简单的方法是从个体水平上进行检测，即将杂种植株栽培在含有黑腐病菌的环境中，观察植物是否抗病。
6．(1)mRNA rhEPO 基因表达载体 (2)启动子 显微注射 (3)维持pH 抗生素
【解析】(1)由图可知由①可以逆转录成cDNA，所以①是mRNA。②是能表达的重组CHO细胞，所以应是表达出人红细胞生成素(rhEPO)，故②是rhEPO。③是基因表达载体，只有构建好的基因表达载体才能导入受体细胞中。(2)RNA聚合酶的识别和结合部位是启动子，导入动物细胞中的常用方法是显微注射法。(3)动物培养液中加入二氧化碳的目的是维持培养液的pH，通常还需要加入一定量的抗生素防止培养过程中的污染。
7．(1)MⅡ中 电刺激
(2)同期发情 桑椹胚或囊胚 (3)基因表达载体的构建 转化
(4)抵抗力 协调与平衡(物种多样性)
【解析】(1)在培育转基因克隆绵羊过程中，首先要进行细胞核移植，即除去处于MⅡ中期的卵母细胞的细胞核，通过电刺激使该细胞与供体细胞融合，进而构建重组胚胎。(2)为保证胚胎移植顺利进行，需要在合适的季节对供、受体母羊进行同期发情处理；重组胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段时，可将其移入受体母羊。(3)科研人员将omega-3合成酶的基因片段转移到了该羊基因组中，利用了基因工程的技术。基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤；目的基因进入受体细胞并维持稳定和表达的过程，称为转化。(4)过度捕杀深海鱼会导致海洋生态系统的生物种类减少，营养结构简单，自我调节能力减弱，最终使生态系统
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的抵抗力稳定性下降；建造海底人工鱼礁，通过对礁体结构合理设计和表面处理，增加藻、贝类附着面积和栖息环境，使投礁海域的生物量有效增加。其目的是改善海洋环境，是实现海洋渔业可持续发展的举措之一，这体现了生态工程所遵循的协调与平衡(物种多样性)原理。
8．(1)人工合成 不同 (2)农杆菌转化法
(3)不能 胰岛素是蛋白质，易被消化道内的蛋白酶水解，不能起到治疗作用 (4)整体性
(5)食物安全 生物安全 环境安全
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