PFAFFL Method for real timePCR

PFAFFL Method for real time PCR

简介：

荧光定量PCR方法：用于相对定量。 适用条件：目标基因与内标基因扩增效率相差较大，特别适用于国内习惯于将内标与目标分开扩增。

优点：不需要标准曲线，结果比delta-delta-Ct法更加精确。

缺点：需要知道在Ct值处的扩增效率，好在OM3已经可以提供该值。

数学推导：

M01：处理1目标基因初始拷贝数 Mn1：处理1目标基因n次循环后拷贝数 M02：处理2目标基因初始拷贝数 Mn2：处理2目标基因n次循环后拷贝数 N01：处理1内标基因初始拷贝数 Nn1：处理1目标基因n次循环后拷贝数 N02：处理2内标基因初始拷贝数 Nn2：处理1目标基因n次循环后拷贝数 EM：目标基因扩增效率 EN：内标基因扩增效率

CtM2：处理2目标基因的Ct值 CtM1：处理1目标基因的Ct值 CtN2：处理2内标基因的Ct值 CtM1：处理1内标基因的Ct值

目标基因扩增结果： Mn2=M02(1+ EM)n Mn1=M01(1+ EM)n

将Ct带入：

Mct2=M02(1+ EM)CtM2=A(域值) Mct1=M01(1+ EM) CtM1=A(域值)

两式相除得：

－

M02/M01=(1+ EM) CtM2CtM1 1

同理得：

－

N02/N01=(1+ EN) CtN2CtN1 2

两个处理的目标基因相对表达量为：(利用1式和2式)

－－

(M02/N02) ：（M01/N01）=(1+ EM) CtM2CtM1/(1+ EN) CtN2CtN1