5、影响酶活性的因素：在____温度和_____pH值条件下，酶的活性最高。温度和pH值偏高或偏低，酶活性都会明显____；过酸、过碱或温度过高，酶的________遭到破坏，酶变性_____；低温使酶活性______，但酶的空间结构________，在适宜的温度条件下酶的活性可以_______。
练习题：
假设你已经探究了果胶酶的最适温度(为45℃)和最适pH(为4．8)，你还想进一步研究果胶酶的最适用量。此时，实验的变量是____________，合理地设置果胶酶用量的梯度后，可通过苹果泥出汁的多少来判断酶的用量是否合适。请根据所给材料和用具完成以下探究实验。(1)材料用具：制备好的苹果泥、恒温水浴装置、试管、漏斗、滤纸、量筒、试管夹、质量浓度为2％的果胶酶溶液、体积分数为0.1％ NaOH和盐酸。
(2)实验步骤：①取6支试管，编号1～6，分别加入____________，调节pH至4.8。②向1～6号试管中分别加入____________，然后放入45％：水浴恒温，水浴____________。③____________。
(3)结果与讨论：如何根据实验数据确定某一果胶酶用量是最适用量?_______________________________________。
《血红蛋白的提取和分离》
必修一关于蛋白质的知识
1.我们平时所吃的食物中，一般都含有蛋白质，肉、蛋、奶和大豆制品中蛋白质含量尤其丰富。蛋白质必须经过消化，成为各种___________，才能被人体吸收和利用。
2. _______是组成蛋白质的基本单位。在生物体中组成蛋白质的氨基酸约有_____种。
3.氨基酸的分子结构通式是________________，在结构上具有的特点是：每种氨基酸分子至少都含有一个_______（-NH2）和一个_______（ ），并且都有一个_______和_______连接在同一个_______上。各种氨基酸之间的区别在于_______的不同。
5. 从氨基酸到蛋白质的结构层次从小到大依次是：
_________→__________→__________→__________→__________。
6. 氨基酸分子互相结合的方式是：一个氨基酸分子的_______和另一个氨基酸分子的_______相连接，同时脱去一分子的_______，这种结合方式叫做____________。连接两个氨基酸分子的化学键（______________）叫做_______。由两个氨基酸分子缩合而成的化合物，叫做_______。依此类推，由 缩合而成的，含有多个_______的化合物，叫做_______。其通常呈 结构，叫做_______。肽链能_______、_______，形成有一定_________的蛋白质分子。
思考1：写出任意两个氨基酸脱水缩合的反应式，并说明在氨基酸相互结合过程脱下的水中的H、O来自哪里？
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7.用等式表示在蛋白质的合成过程中，肽键数、脱水数、氨基酸总数、肽链数之间的关系： 。
8.如果20种氨基酸的平均相对分子质量为a，某个蛋白质分子由n个氨基酸缩合形成，请根据条件完成下列表格： 氨 基 酸 数 游离的氨基酸数 游离的羧基数 脱 水 数 肽 键 数 蛋白质的相对分子质量 1条多肽链 n m条多肽链 n 注：计算蛋白质的相对分子质量时，还要考虑其他化学过程。如二硫键（－S－S－）的形成。 9.蛋白质种类繁多的原因：? ；? ；? ；? ； 因此蛋白质分子的_______是极其多样的。
10.蛋白质的功能：?许多蛋白质是构成________________的重要物质，称为 ；?细胞内的化学反应离不开_______的催化，绝大多数酶是_________；
?有些蛋白质具有____________的功能（如血红蛋白能运输_______）； ?有些蛋白质起___________作用，能够调节机体的__________；
?有些蛋白质有_______功能（如人体内的_______是蛋白质，可以帮助人体抵御病菌和病毒等抗原的伤害。） 思考2：什么是分泌蛋白？其产生途径如何？
1．凝胶色谱法
凝胶色谱法也称做 ，是根据 _____________________分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由 构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质 进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 2．缓冲溶液
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缓冲溶液的作用是 。缓冲溶液通常由 溶解于水中配制而成的。生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例
如：血浆的pH是 ，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。 3．电泳
电泳是指 。许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。电泳利用了待分离样品中各分子 以及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。
两种常用的电泳方法是 和 ，在测定蛋白质分子量时通常使
用 。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 以及 等因素。
4．蛋白质的提取和分离
蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、 、 和 。 5．样品处理
血液由 和 组成，其中红细胞最多。红细胞具有 的特点。红细胞中有一种非常重要的蛋白质 ，其作用是
，血红蛋白有 个肽链组成，包括 ，其中每条肽链环绕一个 ，磁基团可携带 。血红蛋白因含有 呈现红色。
红细胞的洗涤 洗涤红细胞的目的是 ，采集的血样要及时采用 分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的 ，将下层暗红色的 倒入烧杯，再加入 ，缓慢搅拌 ，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至 ，表明红细胞已洗涤干净。
血红蛋白的释放 在 和 作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
分离血红蛋白溶液 将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的 ，第2层为白色薄层固体，是 ，第3层是红色透明液体，这是 ，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。
透析 取1mL的血红蛋白溶液装入 中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的 中，透析12h。透析可以去除样品中 的杂质，或用于更换样品的 。
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6．凝胶色谱操作
第一步要制作 ，第二步要 ，因为 ，所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。在装填凝胶柱时，不得有 存在。因为气泡会 ，降低分离效果。第三步是 。
练习题：
1、将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是 A. 甲苯 B. 血红蛋白水溶液 C. 脂溶性物质的沉淀层 D. 其他杂质的沉淀 2. 下列操作正确的是
A. 分离红细胞时采用低速长时间离心 B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h 3. 样品的加入和洗脱的叙述正确的是
A. 先加入1ml透析后的样品 B. 加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出 C. 如果红色带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功 D. 洗脱时可以用缓冲液也可以用清水 4. 下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是、 A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液
B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 5．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（ ）。 A. NaCl B.甲苯 C.蒸馏水 D.柠檬酸钠
6、在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲溶液，其作用主要是 ( ) A．使酶的活性最高 B．使蛋白质的活性最高 C．维持蛋白质所带的电荷 D．使蛋白质带上电荷
7、胰蛋白酶作用于一定量的某种物质(底物)，温度保持在37℃，pH保持在最适值，生成物量与反应时间的关系如图所示，请回答下列问题：
(1)该酶作用的底物是________________________。
(2)在140 min后，曲线变成水平，这是因为_________________________。 (3)若增加胰蛋白酶浓度，其他条件不变，请在原来图上画出生成物量变化的示意曲线。
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