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蛋白质的定量分析方法

来源:用户分享 时间:2025/10/22 20:12:35 本文由loading 分享 下载这篇文档手机版
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蛋白质定量的一般注意事项:

1. 采用同标准曲线比较的方法只能用来确定与标准蛋白浓度相近、性质类似的蛋白质样品;

2. 定量时一定要是样品浓度在标准曲线限行范围内; 3. 使用溶解蛋白质样品的溶液来溶解标准蛋白;

4. 蛋白质电泳前精确定量目的:保证不同样品之间的可比性以及电泳所适合的上样量;

5. 标准蛋白应尽量选择与所测定的大多数蛋白质性质更接近的蛋白质(例如:测定免疫球蛋白——IgG做标准;测定血清蛋白——BSA),常用的标准蛋白有γ球蛋白和BSA。

6. 蛋白质定量方法的选用(BCA法和Bradford法)

6.1 Bradford法特点:

a.灵敏度高(与Lowry法相比);

b.测定快速简便,且只需加一种试剂(5分钟); c.干扰物质少;

d.蛋白质中精氨酸和芳香族氨基酸含量不同,因此该方法用于不同蛋白质样品测定时有较大差异;

e.相关干扰物:去污剂、X-100、SDS、NaOH等; f.做标准曲线时 轻微非线性(0-1000ug/ml较好)。 6.2 BCA法特点: a.灵敏度高;

b.不受大部分样品中去污剂等的影响,可兼容5%SDS、5%X-100;5% Tween20,60,80;

c.20-2000ug/ml有良好的线性关系;

d.检测不同蛋白质分子的变异系数还远小于Bradford法;

e.该方法收到螯合剂和略高浓度还原剂影响(EDTA小于10mM、DTT(或者巯基乙醇小于1mM)。

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