清的载玻片上，盖上盖玻片，置湿润的平皿内，置35～37℃培养1～3h，置显微镜下观察，可见到由孢子长出短小芽管。
1.3.4.2.3 镜检结果：革兰阳性芽孢杆菌芽孢为厚膜孢子、菌丝、芽管。 1.3.5 黑曲霉菌的确认
1.3.5.1 镜检：可见孢子，菌丝。 1.3.6 铜绿假单胞菌的确认
1.3.6.1 取铜绿假单胞菌新鲜培养物至营养肉汤培养基中，经35℃培养18～24h后，液面可形成菌膜，细菌在深层发育不良，呈微浑浊或透明状，菌液上层为蓝绿色。
1.3.6.1.1 取上述培养物接种于溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基的平板上，培养18～24h后，观察结果：呈扁平、无定形、周边扩散、表面湿润，灰白色，周围时有蓝绿色素扩散。 1.3.6.2 革兰染色、镜检
1.3.6.2.1 革兰染色（见大肠埃希菌检查法5.3.1.2）
1.3.6.2.2 镜检结果：铜绿假单胞菌为革兰阴性、无芽孢杆菌。单个，成对或成短链排列。 1.3.6.3 氧化酶试验
取洁净滤纸片置于平皿内，用无菌玻璃棒取斜面培养物涂于滤纸片上，滴加新配制的1%二盐酸二甲基对苯二胺试液，在30秒内若培养物呈粉红色并逐渐变为紫红色为氧化酶试验阳性，否则为阴性。
若斜面培养物为非革兰阴性无芽孢杆菌或氧化酶试验阴性，均判供试品未检出铜绿假单孢菌。否则，应进行绿侬菌素试验。 1.3.6.4绿侬菌素(Pyocyanin)试验
取斜面培养物接种于PDP琼脂培养基斜面上，培养24小时，加三氯甲烷3~5ml至培养管中，搅碎培养基并充分振摇。静置片刻，将三氯甲烷相移至另一试管中，加入1mol/L盐酸试液约1ml，振摇后，静置片刻，观察。若盐酸溶液呈粉红色，为绿侬菌素试验阳性，否则为阴性。同时用未接种的PDF琼脂培养基斜面同法做阴性对照，阴性对照试验应呈阴性。
若上述疑似菌为革兰阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿侬菌素试验阳性，判断供试品检出铜绿假单胞菌。上述疑似菌为革兰阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿侬菌素试验阴性，应继续进行适宜的鉴定试验，确认是否为铜绿假单胞菌。 1.3.7 生孢梭菌的确认
1.3.7.1 取生孢梭菌新鲜培养物2份，其中1份置80℃保温10分钟后迅速冷却。上述2份供试液直接后处理后分别接种至100ml的梭菌增菌培养基中。置厌氧条件下培养48小时。取上述每一培养物0.2ml，分别涂抹接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板上，置厌氧条件下培养48~72小时。若平板上有菌落生长，应选2~3个菌落分别进行革兰染色和过氧化氢酶试
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验。
1.3.7.2 革兰染色（见大肠埃希菌检查法5.3.1.2） 1.3.7.3 过氧化氢酶试验
取上述平板上的菌落，置洁净玻片上，滴加3%过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。
若上述可疑菌落为革兰阳性梭菌，有或无卵圆形或球形的芽孢，过氧化氢酶试验阴性，判断供试品检出梭菌，否则判供试品未检出梭菌。 1.3.8 溶血性链球菌的确认
1.3.8.1 把冻干菌种管、灭菌滴管、培养皿、营养肉汤培养基，移入微生物实验室的超净工作台上，待用。
1.3.8.2 将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒，稍干，用75%乙醇棉擦净，放在灭菌培养皿内，待干。在无菌条件下，按使用说明将冻干菌种配制成悬液，然后接种到液体或相应培养基平板上，并连同剩余菌悬液一起放置于36℃培养箱中培养24小时。
1.3.8.3 挑取典型菌落接种哥伦比亚CAN血琼脂平板，36±1℃厌氧培养18-24h。 1.3.8.4 革兰氏染色
挑取可疑菌落染色镜检，为革兰染色阳性，球形或卵圆形，常排列呈短链状。 1.3.8.4 触酶试验
挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。溶血性链球菌为阴性。 1.3.8.5 生化试验
分解葡萄糖，产酸不产气。
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