lncRNA在乙脑病毒感染PK15细胞过程中的作用研究

ChinaAnimalHusbandreterinarediciney&VyM():中国畜牧兽医　２０１９,４６７２０４５Ｇ２０５２

lncRNA在乙脑病毒感染PK１５细胞过程中的

作用研究

杜程涛,汪　涵,杨松柏,李向臣,周晓龙?,赵阿勇?

()浙江农林大学动物科技学院,临安３１１３００

摘　要:本研究旨在初步探索乙脑病毒(感染P筛选与病毒感染相关的l并JEV)K１５细胞后的增殖情况,ncRNA,利用实时荧光定量P在NPK１５细胞中病毒的增殖情况,CR检测病毒感染后lncRNA的表达水平,ONCODE数据对其进行亚细胞定位及靶基因预测.通过免疫荧光试验来检测病毒结构蛋白E的表达情况,采用TCID５０法检测、库对l通过sncRNA进行亚细胞定位,tarBaseNONCODE、KEGG等数据库对其进行靶基因预测和信号通路分析.

,PK１５细胞在感染JEV１２h后,lncRNAA、B、C表达水平均无显著变化(P＞０．０５)lncRNAD表达水平极显著下);),降(感染JP＜０．０１EV２４、３６和４８h后lncRNAA、B、C表达水平极显著上升(P＜０．０１lncRNAD表达水平极).显著下降(P＜０．０１lncRNAA主要定位在胞质溶胶,lncRNAB在细胞核和细胞质中均有分布,lncRNAC主要定位在细胞质中,在细胞核中也有可能分布,lncRNAD可能在细胞内呈现广泛性分布.通过靶基因预测和信号通、等信号通ND２、ND４等.信号通路分析发现lncRNA可能通过肿瘤坏死因子(TNF)NFＧκB和Toll样受体(TLR)路参与病毒感染后的增殖过程.本研究为进一步探索宿主细胞lncRNA对病毒增殖的影响奠定一定的基础.;关键词:乙脑病毒(增殖lncRNA;PK１５细胞;JEV)中图分类号:S８２８

文献标识码:A

－５．７５

/结果显示,感染后３JEV感染PK１５细胞后,２４~３６h为病毒滴度指数增长期,６h病毒滴度已达１０TCIDmL.５０

路分析,lncRNAA、B、C的靶基因主要为OAS１、OAS２、OASL、COX１等,lncRNAD的靶基因主要为DST、ND１、

:１/:资源服务)标识码(Doi０．１６４３１．cnki．１６７１Ｇ７２３６．２０１９．０７．０２０　　　　　　　　开放科学(OSID)j

StudntheRoleoflncRNAintheProcessofJaaneseEncehalitisyopp

VirusInfectinK１５CellsgP

??

,WANGH,YANGS,L,ZDUChentaoanonbaiIXianchenHOUXiaolonHAOAongggg,Zyg(ColleeonimalScienceandTechnoloheianniversitgfAgy,ZjgA&FUy,

Lin’an３１１３００,China)

:AbstractTheaimofthisstudastoinitiallxloretheproliferationofJaaneseencehalitisywyeppp

,,virus(JEV)infectedwithPK１５cellsscreenthelncRNAsassociatedwithviralinfectionsand,TCIDethodandRealＧtimePCRwasusedtodetecttheexressionleveloflncRNAafterviralp５０m

,infection．SubcellularlocalizationoflncRNAwascarriedoutintheNONCODEdatabasetaretg

－５．７５

/creasedexonentiallfrom２４to３６h,andthevirustiterreached１０TCIDmLat３６hafterpy５０

redictitssubcellularlocalizationandtaretgenes．TheexressionofviralstructuralproteinEpgp

,wasdetectedbmmunofluorescencetheproliferationofvirusinPK１５cellswasdetectedbyiy

,enepredictionandsinalathwanalsiswereperformedbtarBaseNONCODE,KEGGandggpyayys

otherdatabases．TheresultsshowedthatafterinfectionofPK１５cellsbEV,theviraltiterinＧyJ

收稿日期:２０１９Ｇ０１Ｇ２３

);)基金项目:浙江省自然科学基金(浙江农林大学启动基金(LY１９C１７０００３、LY１９C１７０００２W２０１８００４３

),:作者简介:杜程涛(男,浙江临安人,硕士生,研究方向:动物遗传育种,１９９４ＧEＧmail１１３５３７３８５９＠q．comq

),:周晓龙(男,安徽淮北人,博士,讲师,研究方向:动物分子遗传育种和抗病育种,?通信作者:１９８３ＧEＧmailzhouxiaolon＠zafu．edu．cng

),:赵阿勇(男,安徽滁州人,博士,教授,研究方向:家禽家畜遗传育种,１９６７ＧEＧmailza５０３＠zafu．edu．cny