通过病毒外壳蛋白ELISA法测定慢病毒滴度 

通过病毒外壳蛋白ELISA法测定慢病毒滴度

简介

根据ZeptoMetrix的p24试验，确定每毫升慢病毒的转导单位（TU/mL）。通过使用来自Didier Trono的转换因子，将p24的浓度转换为病毒滴度来确定滴度计算方法。每pg p24抗原中有大约1 x 104个慢病毒的物理微粒。根据ELISA试验结果，每pg p24抗原中有100个转导单位（TU）。

材料

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靶向选定基因的慢病毒 来自ZeptoMetrix的p24 ELISA 计算器或电子表格程序

实验方案

1. 稀释样品750到3000倍。

2. 使用p24 ELISA试剂盒，并按照制造商的说明进行操作。 3. 永远用空白对照使读版器“归零”。 4. 永远使用p24标准曲线进行校准。

5. 使用两种独立的稀释液用于制作标准曲线，包括五种浓度和浓度为0的p24。 6. 将标准曲线绘制成p24浓度比OD450。 7. 拟合标准曲线应依从R2> 0.95。

8. 确定斜率m和截距b。（您也可以下载并使用附件中的电子校准表格。）

9. 根据以下公式计算稀释病毒的滴度TU/mL（您也可以下载并使用附件中的电子表格。）

注意事项

下载附件中的电子表格（95 Kb）以计算TU/mL。 转换因子推导：

a. （2×103个分子）×（每PP的24×103 Da p24）=（48×106）

b. 48×106/Avogadro常数=（48×106）/（6×1023）= 8×10-17 g p24/PP c. 每1×10-16克p24约有1PP d. 每pg p24有1×104 PP e. 每1000PP有100TU