第2讲 微生物的培养及应用
1．(2015·四川省攀枝花市统一检测)下列有关微生物的培养或纯化的叙述，错误的是
( )
A．在培养微生物前要先对培养基进行灭菌处理再接种 B．培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径 C．分离自养型微生物的方法是用以纤维素作为唯一碳源的培养基 D．分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法
解析：选C。在培养微生物前要先对培养基进行灭菌处理再接种，防止其他微生物混入，A正确；酵母菌是兼性厌氧型微生物，因此培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径，B正确；用纤维素作为惟一碳源的培养基是用来分离纤维素分解菌的，分离自养型微生物要用不含有机碳源的培养基，C错；分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法，D正确。
2．(2015·山东滨州期末)下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是( ) A．微生物培养前，需对培养基进行消毒 B．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法 C．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度
D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源
解析：选A。理解微生物分离、培养的原理和计数方法是解题关键。微生物培养前，需对培养基进行灭菌处理，要将所有的微生物杀死；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌；土壤中各类微生物的数量是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
3．(2015·广东深圳模拟)某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌的数量，并从中筛选出能分解石油的细菌，下列操作错误的是 A．利用平板划线法对细菌进行计数 B．以石油为唯一碳源的培养基筛选 C．采用稀释涂布平板法分离菌种 D．称取和稀释土壤时应在火焰旁
( )
解析：选A。理解微生物培养的过程和计数方法是解题的关键。平板划线法能对细菌进行分离纯化，但不能对细菌进行计数，A错误。 4．下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：
成分 NaNO3 K2HPO4 KCl MgSO4·7H2O FeSO4 (CH2O) H2O 青霉素 含量 3 g 1 g 0.5 g 0.5 g 0.01 g 30 g 1 000 mL 0.1万单位 (1)依物理性质分，该培养基属于__________培养基。依用途划分，则属于__________培养基。
(2)根据培养基原料分析，所培养微生物的同化作用的类型是__________。
(3)该培养基中的碳源是__________。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是__________和__________，倒平板时，一般需要将培养基冷却至__________左右，在__________附近操作。
(4)若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是__________，应加入的物质是__________；为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入__________，若产生__________，则证明有纤维素分解菌存在。
解析：(1)从培养基的成分上看，没有琼脂等凝固剂，该培养基属于液体培养基；从用途上分析，加入青霉素可以杀死细菌、放线菌，选择出霉菌、酵母菌等，该培养基属于选择培养基。(2)培养基上的微生物以(CH2O)为碳源，为异养型微生物。(3)考查微生物培养的基本操作。(4)纤维素分解菌以纤维素为碳源，故应去除(CH2O)；同时培养细菌应去除能杀灭细菌的青霉素。刚果红可与纤维素形成红色复合物，用于检测纤维素分解菌是否存在，若存在，菌落周围会形成透明圈。
答案：(1)液体 选择 (2)异养型 (3)(CH2O) 调pH 灭菌 50 ℃ 酒精灯火焰 (4)青霉素和(CH2O) 纤维素粉 刚果红 透明圈
5．据报道，从部分企业生产的速冻食品中检出葡萄球菌超标，“细菌门”事件引起公众的普遍关注。葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请回答下列问题。
(1)某兴趣小组欲检测某果汁类食品中是否含有葡萄球菌，请帮他们完善下列实验步骤。 ①配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节pH，分装到锥形瓶后进行__________，在无菌状态下加入卵黄液(100 mL 10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀)摇匀后立即倒平板。 ②接种：取待检果汁2.5 mL加入22.5 mL灭菌生理盐水中，制成接种样液。 实验组：将接种样液用______________法接种在含卵黄的固体培养基上。 对照组：将______________接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作为空白对照。 将上述接种后的培养皿同时放在36 ℃的恒温箱中培养48 h。
③观察：观察培养基表面_________________________________________。
(2)培养基中的牛肉膏和蛋白胨为葡萄球菌生长和繁殖提供____________。葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl溶液，所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl溶液可以将它分离出来，此培养基属于________培养基。
(3)若要统计某土壤样品中该活菌数目，宜采用__________________法。
解析：(1)由于葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环，所以该实验的观察指标为培养基表面是否出现周围有乳浊环的菌落。(2)选择培养基可以使所需要的细菌生长，抑制其他细菌生长。(3)统计某土壤样品中活菌数目可采用稀释涂布平板法。
答案：(1)①灭菌 ②平板划线 无菌生理盐水 ③是否出现周围有乳浊环的菌落 (2)碳源和氮源 选择 (3)稀释涂布平板
6．自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 (1)实验步骤：
①制备稀释倍数为10、10、10、10、10的系列稀释液。
②为了得到更加准确的结果，应选用________________法接种样品。 ③适宜温度下培养。 (2)结果分析：
2
3
4
5
6
①测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为10的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是________________________________________________， 理由是__________________________________________________________。 A．一个平板，统计的菌落数是230
B．两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240 C．三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260 D．四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平均值250
②一同学在稀释倍数为10的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是__________个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)。
③用这种方法测定的大肠杆菌菌落数比实际活菌数量__________，因为_________________________________________________________________。
解析：为了得到更加准确的结果，应用稀释涂布平板法接种样品。在统计结果时应选取多个菌落数在30～300的平板计数，取其平均值。每毫升样品中的菌落数为234÷0.1×10＝2.34×10(个)。因为一个菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。
答案：(1)稀释涂布平板 (2)①D 在设计实验时，一定要涂布至少三个平板，才能增强实验的说服力与准确性；一般选择菌落数在30～300的平板进行计数 ②2.34×10 ③少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落
7．甲、乙两同学学习完微生物的实验室培养后，要利用所学知识研究水中微生物的情况。 Ⅰ.甲同学为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制如下培养基进行培养：
蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 蒸馏水 10 g 5 g 5 g 2 g 1 000 mL 8
5
85
6
将pH调到7.2 (1)该培养基所含有的碳源有_______，其功能是_________________________。 (2)该培养基所含有的氮源有________，其功能是_______________________。
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