实验二 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

实验二 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

一、 实验目的与要求

观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 二、 基本原理

1.单个的酵母菌合同是常见细菌的几倍甚至几十倍。为单细胞，呈圆形，卵形或椭圆形，内有细胞核，液泡和颗粒体物质。有的种类能产生子囊孢子或掷孢子、冬孢子、担孢子等。有的种类一定条件下形成假菌丝或真菌丝。大多数采取出芽方式进行无性繁殖，也可通过结合产生子囊孢子进行有性生殖。

2. 酵母菌在液体培养基中生长时，能利用其中的可发酵型糖，并产生气体，有些产生挥发性的酯香味，菌体可沉于管的底部或悬浮在培养液中，或漂浮在培养液省形成菌膜或菌醭（分析一下为什么）。当其生长在固体培养基上时，菌落形态与细菌相似，但较大较厚，呈乳白色或红色，表面湿润、粘稠，易被挑起。随时间延长，菌落颜色往往变暗，有些菌落边缘呈皱褶状。

3. 由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。美兰对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型呈无色。由于细胞的新陈代谢，，活细胞内有较强还原能力，使美兰由氧化型转变为无色的还原型，染色后活细胞呈无色。死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞内还原力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。 三、实验材料

1.酵母液体培养物和斜面培养物。 2.吕氏碱性美兰染液，革兰氏染色用碘液。 3.仪器和其他用品 四、方法步骤 1.制片

先在载玻片中央滴加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，再滴加少量水稀释。无菌操作取试管中培养的酵母菌少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。 2.镜检

将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜，再用高倍镜，观察酵母菌的形态和出

芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。染色30分钟后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变化。用0.05%染液作对照同时进行上述实验。 五、注意事项

1.用接种环将菌体与染液混合式不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

2.低价染液要始终，否则用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。 六、实验报告

1.结果：写出你看到的酵母菌落特征；

绘图说明酿酒酵母形态及出芽生殖情况；

根据你所观察到的染液浓度及作用时间与酿酒酵母死活细胞数量变化情况，填写下表。

实验结果记录表

浓度 作用时间 每视野活细胞数/个 每视野死细胞数/个 2.思考

①根据你的观察结果，染液浓度及作用时间与酿酒酵母死活细胞数量比例变化是否有关系（计算一下死亡率）？试分析原因。

高浓度的染料会使细胞失水而死亡；氧化还原代谢反应需要一定的时间。

②酿酒酵母处理通过出芽方式进行无性繁殖外，还可以形成子囊孢子进行游行生殖，你再实验中是否观察到酿酒酵母的子囊孢子?若未观察到，试分析原因。

在营养条件较好的培养条件下通常只进行快速大量的无性繁殖。

3min 0.1% 30min 3min 0.05% 30min