实验3 邻菲啰啉分光光度法测定水中微量铁
一、实验目的
1.1 学习和掌握邻菲啰啉光度法测定Fe(Ⅱ)的原理和方法。 1.2 熟悉DU650紫外-可见分光光度计的基本构造及使用方法。 二、实验原理 2.1原理：
邻菲啰啉（1,10-邻二氮菲）是光度法测定铁的一种有机络合剂，在PH=2-9范围内（一般PH=5-6），它与二价铁离子形成稳定的红色络离子。其反应如下：
C12H8N2.H2O + Fe2+=[Fe(C12H8N2)3]2+
生成的邻菲啰啉亚铁络离子，在510nm附近有一吸收峰，摩尔吸光系数ε510=1.1*104 L. moL-1. cm-1，其LgK=21.3。反应能迅速完成，且显色稳定，灵敏度高，适合于微量铁的测定。在含铁0.1-8.0mg/L范围内,该被测物质的吸光度与浓度成正比A=KCL，符合朗伯-比尔定律。因此，用紫外-可见分光光度法测定水中微量铁。
2.2标准曲线法
配制已知一系列标准溶液，在相同条件下，由低浓度到高浓度依次测定其吸光度值，以标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。在同样条件下测定样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出待测样品的浓度值，即可计算出样品的质量浓度。
2.3注意事项：
（1）被测溶液用PH= 4.5-5的乙酸-乙酸钠缓冲溶液保持其酸度。 （2）必须保持在亚铁状态，二价铁不稳定，因此在显色前加入还原剂盐酸羟胺，还原其中的Fe3+,同时防止Fe2+被空气氧化。反应为：
2Fe3+ + 2NH2OH·HCl → 2Fe2+ + N2 ↑+ 2H2O + 4H+ + 2Cl- 三、仪器与试剂
3.1仪器：DU650型紫外-可见分光光度计 美国Beckman公司制造 3.2试剂：
（1）邻菲啰啉水溶液0.15%（新配制2周内,避光保存）。
（2）盐酸羟胺水溶液5%（新配制2周内,避光保存）
（3）乙酸-乙酸钠缓冲溶液（ph=4.5-5）：称取13.6gNaAc加少量蒸馏水溶解后，加入120mL冰醋酸，加蒸馏水稀释至500mL。
（4）1：1盐酸20mL
（5）铁标准储备液（1mg/mL）：准确称取3.5110g硫酸亚铁铵[（NH4）
2Fe(SO4)2.6H2O],于烧杯中加入
1：1盐酸20mL和少量水溶解，然后转移至500mL
容量瓶中，蒸馏水定容至刻线，此溶液含Fe2+1mg/mL。
(6) 铁标准工作液（10ug/mL）：吸取1mL铁标准储备液，放入100mL容量瓶中用蒸馏水定容至刻度。
(7) 水样前处理：当采集水样后不立刻测定时，可按100：1体积加入HAc-NaAc缓冲溶液或加入2%盐酸，或用0.45μm滤膜过滤后进行分析。
（8）0.1moL.L-1盐酸溶液或0.1moL.L-1氢氧化钠溶液。 四、分析步骤
4.1标准曲线的制作：在6只25mL比色管中，用吸量管分别加入10ug Fe2+标准溶液。
(ug)： 0.00, 0.2, 0.40, 0.80, 1.20, 1.60 (mL)：0.00, 0.5, 1.00 2.00, 3.00 4.00
然后依次加入HAc-NaAc缓冲溶液2.5mL，盐酸羟胺1.0mL，加入0.15%邻菲啰啉水溶液2.0mL, 蒸馏水定容至刻线，摇匀，放置10min后，用1cm玻璃比色皿，在波长510nm处读取吸光度值，绘制吸光度-浓度曲线。
4.2样品的制备及测定：
吸取自来水样10.0mL，于25mL比色管中，然后按上述（4．1）制备样品试液。测定出试液吸光度值，在曲线上查出试液浓度，计算出铁浓度。
4.3比色皿一致性的检验与校正
将同样厚度的六个比色皿分别编号，以试液空白溶液为校准液，在所用波长（510nm）处测定各比色皿的吸光度值或透光率，结果应相同。若差异显著，应将比色皿重新洗涤后再测试，用1：3盐酸或乙醇，通过反复洗涤使透光率或吸光度基本一致为止。
4.4最大吸收波长的选择
选择已制备好的0.8ug/mL铁标准溶液，以标准溶液空白为参比，用1cm玻璃比色皿，在分光光度计的扫描波长窗口，从400~800nm波段扫描吸收峰，（或在波长480~530nm间，每隔10nm测定一次吸光度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线），选择吸光度最大处的波长为测定波长。
4.4溶液酸度的影响：
在PH=1~10范围内，选择PH为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10十个点，将配好的0.1moL.L-1盐酸溶液或0.1moL.L-1氢氧化钠溶液，分别取一定体积，用PH计准确测定PH值待用。在10只50mL的容量瓶中各加入10ug/mL2mL,分别加入测定待用的0.1moL.L-1盐酸溶液2、4、6、8、10、12、14、16、18、20mL，各加入盐酸羟胺1.0mL，加入0.15%邻菲啰啉水溶液2.0mL, 蒸馏水定容至刻线，在相同条件下，测定吸光度，以PH值为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择吸光度最大处为最佳测定PH值。
4.5显色剂浓度的影响：
在10只50mL的容量瓶中各加入10ug/mL2mL, HAc-NaAc缓冲溶液2.5mL，盐酸羟胺1.0mL，分别加入0.15%邻菲啰啉水溶液0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5 mL, 蒸馏水定容至刻线，摇匀，放置10min后，用1cm玻璃比色皿，在波长510nm处读取吸光度值，绘制吸光度—显色剂用量曲线，选择出显色剂最佳用量。
五、思考题
1、实验哪些试剂应准确加入？哪些不必准确加入？为什么？ 2、实验测定时能否用石英皿？为什么？
实验4 维生素B1的荧光特性和含量测定
一、实验原理：
维生素B1在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，用异丁醇提取后在紫外光（λex365nm）照射下呈现蓝色荧光（λem435nm），通过与对照品荧光强度比较，即可测的供试品含量。
二、仪器及试剂
1、仪器：FP—750荧光分光光度计（JASCO Inc. Japan）。 2、试剂：
(1)氧化试剂的制备：取新鲜配制的1.0%铁氰化钾溶液4.0mL，加3.5mol/L氢氧化钠溶液配成100mL，与4小时内使用。
(2)对照品溶液的制备：取维生素B1对照品约25mg，精密称定，溶于300mL的稀醇
溶液，用3mol/L盐酸溶液调节pH4.0，加稀醇溶液稀释成1000mL，作为贮备液，避光冷藏，每月配制一次，取贮备液适量，用0.2mol/L盐酸溶液逐步定量稀释至0.2ug/mL的溶液。
(3)供试品溶液的制备：取供试品适量，用0.2mol/L盐酸溶液制成100ug/mL的溶液（若难溶，可在水浴上加热溶解），精密量取5ml，逐步定量稀释至0.2ug/mL的溶液。
三、实验步骤
取3支具塞试管，各精密加入对照品溶液5mL，于其中两支试管中迅速加入(1-2秒)氧化剂各3mL，在30秒内再加入异丁醇20mL，密塞，剧烈振摇90秒。于另一支试管中加入3.5mol/L氢氧化钠溶液3mL以代替氧化剂，并照上述方法操作，作为空白。
另取3支以上试管，各精密加入供试品溶液5mL，照上述方法同样处理。 于上述试管中各加入无水乙醇2mL，旋摇数秒，待分层后，取上层澄清的异丁醇约10mL，只荧光计中测定其荧光强度。利用对比法求得供试品溶液中维生素B1的含量。
四、思考题
1、实验中铁氰化钾的作用是什么？
(1 实验5 有机化合物红外光谱的测定
一、实验原理
红外光谱是研究分子振动和转动信息的分子光谱，它反映了分子化学键的特征吸收频率，可用于化合物的结构分析和定量测定。
根据实验技术和应用的不同，一般将红外光区划分为三个区域：近红外区（13158～4000cm-1）,中红外区（4000～400cm-1）和远红外区（400～10cm-1）,
相关推荐：
loading