医药开发 验证方案 方案#：PD 修正：000 题目：ATP0603原料及产品含量测定方法验证方案
改动历史
日期 修正 改动备注 有效日期：
08/03/24
原始草稿 1
000
1 目的
对ATP0603原料及产品含量测定方法的可行性进行验证。
2 验证项目
验证方法的线性、范围、准确度、精密度（重现性和中间精密度）、专一性及溶液稳定性。
3 含量测定方法
盐酸吉西他滨含量测定方法采用WS1－(X-448)－2003Z方法（见附件）进行检测，方法如下：
3.1 试剂
下面列出的或相当的级别 盐酸吉西他滨标准品 甲醇 醋酸铵 冰醋酸 纯化水
3.2 色谱条件 仪器： 色谱柱： 流动相： 流速： UV检测器 进样量： HPLC系统带自动进样，柱温控制和紫外检测器 Alltech C18 4.6×250mm, 5?m 0.05mol/L 醋酸铵缓冲液pH5.7：甲醇＝90：10（v/v） 1.0 mL/min 268nm 20μl AR级 HPLC级 AR级 AR级 HPLC级 4 验证内容
4.1 线性和范围
按含量测定方法配制贮备溶液，并分别稀释成50%、75%、100%、125%、150%水平，每份样品进样3次。
举例：
精密盐酸吉西他滨标准品100.0mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得1.00mg/g贮备溶液。精密移取贮备液1.0ml至10ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀即得100%浓度水平的溶液。
2
在样品配制浓度±50%范围内成线性，R应不小于0.999。
4.2 准确度
按含量测定方法配制浓度水平为50%、75%、100%、125%、150%的溶液，100%浓度水平的配制6份，其余浓度水平的各配制三份，每份进样一次测定回收率。
举例：
精密盐酸吉西他滨标准品10.0mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得100%浓度水平的溶液。
计算公式：
Ccal
回收率% = ×100
Creal
Ccal 测得含量，mg/g Creal 实际含量，mg/g
回收率范围应在98.0%~102.0%。每个浓度水平含量测定结果的RSD应不超过2.0%。以测得含量为纵坐标，实际含量为横坐标作图（无需强制过零点），R2应不小于0.998。
4.3 重现性
按含量测定方法配制浓度水平为100%的溶液6份并检测含量(可使用准确度实验所配制的溶液)。
6份样品的含量检测结果的RSD不超过2.0%。
4.4 中间精密度
实验室另一化验员按含量测定方法配制浓度水平为100%的溶液测定含量。
6份样品的含量测定结果的RSD应不超过2.0%，两个化验员含量测定结果的平均值的RSD不超过2.0%。
4.5 专一性
按含量测定方法分别配制空白溶液、添加剂溶液、掺杂了已知杂质的标准溶液各一份，每份进样一次。
色谱图上不应出现任何可能干扰含量测定的杂质峰。溶剂峰与标准物质峰的分离度如果小于1.5，则溶剂峰面积不得超过标准物质峰面积的0.05%。
4.6溶液稳定性
APT0603产品需在酸、碱、加热、氧化及光照条件下测试其稳定性。 参考以下表格配制溶液：
3
对照组 酸 碱 氧化 加热 光照 光照对照组 移取1.0ml 1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。 移取1.0ml 1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加入2.5ml 2M盐酸，室温放置1小时，加入2.5ml 2M NaOH，加水定容至刻度，摇匀。 移取1.0ml 1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加入2.5ml 2M NaOH，放置24小时，加入2.5ml 2M盐酸，加水定容至刻度，摇匀。 移取1.0ml 1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加入2.5ml 6% H2O2，室温放置1小时，加水定容至刻度，摇匀。 移取1.0ml 1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加入约8ml水，将容量瓶置于80℃水浴锅中恒温7天。待容量瓶冷却至室温后加水定容至刻度，摇匀。 移取1.0ml 1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加适量水，以200W/m2的紫外光照射至少9小时，再以可见光照射22小时，加水定容至刻度，摇匀。 移取1.0ml 1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加适量水，以铝箔包裹容量瓶，以200W/m2的紫外光照射至少9小时，再以可见光照射22小时，加水定容至刻度，摇匀。
按含量测定方法配制浓度水平为100%的标准溶液和供试品溶液，分别于室温和4℃放置，在一定时间间隔进样检测确认溶液的稳定性。
CDay-x
稳定度% = ×100
CDay-0
Cday-x 第X天测得含量，mg/g Cday-0 第0天测得含量，mg/g
稳定度在98.0%~102.0%之间则可认定溶液是稳定的。
4
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