HE染色步骤

HE染色步骤

（1）切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。

（2）移入二甲苯和纯酒精（1∶1）混合液中5分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可略）。 （3）入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。最后经蒸馏水转入染液。 （4）苏木精染液染色5～15分钟。

（5）水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精（70％酒精配制）分色片刻。镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。

（6）流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色。 （7）蒸馏水短洗。

（8）0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。

（9）依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。

（10）二甲苯透明（二次），共约10分钟。

（11）封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。

4.9 苏木精染液配制 配好苏木精染液是HE染色的关键。苏木精配制有多种配方，关键在于氧化。如加氧化汞作氧化剂时，要防止氧化过度，同时注意形成的氧化膜污染切片。加碘酸钠作氧化剂时，就无需把苏木精液煮沸。要配制自然成熟的苏木精则不需加氧化剂，但要较长时间才能氧化成熟。不同苏木精染液的染色时间为5～20分钟，自然氧化成熟的苏木精液染色时间可以更长。 * 苏木精染液的配制方法： （1）Harri’s苏木精

苏木精 1 g 无水乙醇 10 ml 硫酸铝钾 20 g 蒸馏水 200 ml 氧化汞 0.5 g 冰醋酸 8 ml

分别用无水乙醇溶解苏木精，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。 （2）改良Lillie-Mayer’s苏木精 苏木精 2.5 g 无水乙醇 20 ml 硫酸铝钾 5 g 蒸馏水 330 ml 碘酸钠 250 mg 甘油 150 ml

冰醋酸 10 ml

分别用无水乙醇溶解苏木素，蒸馏水溶解硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。 （3）Mayer’s苏木精

苏木精 100 mg 蒸馏水 100 ml 碘酸钠 20 mg

硫酸铝铵 5 g

柠檬酸 100 mg 水合氯醛 5 g

用蒸馏水溶解苏木精后，依次加入碘酸钠、硫酸铝铵、柠檬酸和水合氯醛，过滤后存于4℃冰箱备用。

4.10 分化 分化是把过染的细胞核部分和不应着染苏木精的细胞浆等组织成分脱色，从而使着染的细胞核与细胞浆及细胞周围的组织成分对比清晰。分化时间的长短视组织的性质，切片的厚薄，苏木精染色的深浅和分化液的新旧来决定，一般是2～5秒钟，若切片不分化或分化不足，组织不仅着染细胞核，也着染细胞浆等其他成分，使组织结构对比不清晰；若分化过度，细胞核过淡或褪色。用Mayer’s苏木精染色，通常都不用分化。盐酸乙醇分化后，一般需流水冲冼，避免切片留有盐酸，使细胞核褪色。另一方面苏木精经酸后要经流水冲洗来促兰。流水冲冼一般需15～30分钟。如要缩短时间，可用碱性的促兰液来代替流水冲洗。

* 盐酸-乙醇分化液的配制 浓盐酸 1ml 70%乙醇 99ml * 促蓝液的配制 （1）Scott促蓝液

重碳酸钠 0.35 g 硫酸镁 2g 蒸馏水 100ml 麝香草酚少量

（2）氢氧化氨水溶液

浓氨水 0.1～1ml 蒸馏水 99ml （3）碳酸锂水溶液

碳酸锂 1 g 蒸馏水 100ml

4．11 曙红（伊红）染液配制 曙红主要是染细胞浆和肌纤维、胶原纤维和红细胞等作为对比染色，染色适中与细胞核相衬，红兰对比鲜明。 在曙红水溶液中加冰醋酸可起促染作用， 但加酸太多，可使曙红沉淀而慢慢失效。 * 曙红液的配制

（1）0.25～0.5%曙红Y水溶液。 曙红Y 0.25～0.5g 蒸馏水 100ml 冰醋酸 1滴

（2）0.5曙红Y—氯化钙水溶液 曙红Y 0.5g 蒸馏水 100ml 无水氯化钙 0.5g （3）0.25～0.5%曙红Y乙醇溶液。 曙红Y 0.25～0.5g 80%乙醇 100ml