归纳总结
1.划线分离法的操作步骤
2.涂布分离法的操作步骤 (1)操作图示
(2)相关说明
①将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按10～10的顺序编号。
②用移液管吸取1mL培养的菌液，注入10倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。
③从10倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入10倍稀释的试管中，重复②步的混匀操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。
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例3 (2018·浙江效实中学期中)如图表示利用划线分离法分离和纯化大肠杆菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是( )
A.步骤①倒平板操作时，只需要在超净台中不需要在酒精灯火焰旁进行 B.步骤②③使用的工具是接种环，接种前需在明火上烧红后冷却 C.步骤④恒温培养箱培养后的结果说明整个过程中蘸取菌液4次 D.该方法使单菌落更容易分开，但操作复杂些 答案 B
解析 即使在超净台中，步骤①倒平板操作时，也需要在酒精灯火焰旁进行，A错误；步骤②③中接种环都需要进行灼烧灭菌，即在火焰上灼烧，待冷却后才可以蘸取菌液进行平板划线，B正确；划线分离法中只蘸取菌液1次，C错误；平板划线法操作简单方便，但是单菌落不易分离，D错误。
例4 (2018·嘉兴高二检测)图甲、图乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：
(1)图甲是利用__________法进行微生物接种，图乙是利用______________法进行微生物接种。
(2)这两种方法所用的接种工具分别是______________和__________；在接种过程中对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是______________和酒精消毒。
(3)下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是________(填“图甲”或“图乙”)。
(4)下列关于微生物培养和分离的叙述不正确的是________。 A.利用图乙所示接种法可以分离微生物但不能对微生物进行计数 B.接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落
C.利用图甲所示接种法接种过程中，每次划线前后都要对接种环进行灭菌
D.图乙所示接种法中使用的接种工具须保存在70%的酒精中
答案 (1)划线分离 涂布分离 (2)接种环 玻璃刮刀 灼烧灭菌 (3)图乙 (4)A 解析 (1)分析图示可知，图甲为用划线分离法进行微生物接种，图乙是利用涂布分离法进行微生物接种。(2)前者利用的工具是接种环，后者利用的工具是玻璃刮刀。对于接种环而言，灭菌的操作方法是灼烧，玻璃刮刀通常浸泡在70%酒精中消毒。(3)题图中，菌落均匀分布，分离效果较好，是涂布分离法操作的结果。(4)采用涂布分离法，可以通过培养基表面的菌落数，对微生物进行计数，但采用该方法计数通常比实际菌落数偏低，A项错误。 方法技巧 划线分离法与涂布分离法的比较 项目 划线分离法 连续划线。由于划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次划线从原理 上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 操作工具 使用要求 特点 相同点
接种环 用时需灼烧 操作简单，但是单菌落不易分离 涂布分离法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养皿表面形成单个菌落 玻璃刮刀 放置在70%酒精中，用时需灼烧 操作复杂，单菌落易分离 使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种
1.判断正误：
(1)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有划线分离法和涂布分离法( ) (2)在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌( )
(3)单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株最简便的方法之一
( )
(4)接种环在每次转移菌种之前都需要进行高压蒸汽灭菌，以杀灭接种环上的杂菌( ) (5)根据微生物对营养物质的需求，配制相应的培养基，如“细菌喜荤，霉菌喜素”，经高压蒸汽灭菌之后还要调节pH( )
(6)有些化合物不能加热，如尿素等需采用玻璃砂漏斗进行过滤灭菌，常用的有G5或G6玻璃砂漏斗( )
(7)培养微生物的培养基分装到培养皿后进行灭菌( ) 答案 (1)√ (2)× (3)√ (4)× (5)× (6)× (7)×
2.(2019·西湖区高二检测)金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒。下列有关接种金黄色葡萄球菌的实验叙述错误的是( ) A.将灼烧的接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位 B.取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌 C.对接种环进行灼烧处理 D.接种后还要将试管口灭菌加塞 答案 A
解析 接种环伸入试管后应先接触未长菌的部位，待接种环冷却后再接触长菌多的部位。 3.(2018·浙江效实中学检测)在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图所示。有关叙述错误的是( )
A.接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 B.连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 C.接种过程中至少需要对接种环灼烧5次 D.甲中a区域为划线的起始位置 答案 D
解析 培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，A项正确；菌液经过连续划线，菌液中的菌体越来越少，最后容易形成单菌落，B项正确；在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，因此按照图中划线顺序(d→c→b→a)，整个划线过程中至少需要对接种环灼烧5次，C项正确；每次划线的菌种来自上一区域的末端，因此划线的起始区域菌落多，由图乙可知，甲中d区域菌落多，为划线的起始位置，D项错误。
4.下列关于微生物的培养和分离的叙述中，不正确的是( ) A.细菌能在液体培养基中以二分裂方式迅速扩增
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