B．自动进样器上有灰尘沉积 C．运行前未将样品盘归位
D．进行电极定标操作时X/Y轴归位尚未结束就运行Z轴归位 E．凝胶干燥而阻塞毛细管
9. 平板电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，可能原因有（ ）
A．电泳缓冲液配制不正确 B．电极导线未接好或损坏 C．正极或负极铂金丝断裂
D．正极或负极的胶面未浸入缓冲液中
E．电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端
10. Sanger双脱氧链末端终止法和Maxam-Gilbert化学降解法的共同点包括（ ）
A．反应体系中均有ddNTP
B．都是根据在某一固定的点开始核苷酸链的延伸，随机在某一个特定的碱基处终止 C．均产生A、T、C、G四组不同长度的一系列核苷酸链 D．均在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳进行片段的分离和检测 E．均可检测DNA的一级结构
11. 在Sanger双脱氧链末端终止法测序反应体系中，ddNTP与dNTP相比的异同点有（ ）
A．ddNTP在脱氧核糖的5?位置上缺少一个羟基 B．ddNTP在脱氧核糖的3?位置上缺少一个羟基 C．DNA链在掺入dNTP的位置终止链的延伸
D．均可与正在延伸的DNA链的末端脱氧核糖3?-OH发生反应 E．ddNTP不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键
12. 下列有关Sanger双脱氧链末端终止法测序反应体系反应原理的叙述中，正确的是（ ）
A．加入的核苷酸单体包括dNTP和ddNTP B．低温退火时，引物与模板形成双链区 C．沿着3?-5?的方向形成新链
D．DNA聚合酶结合到DNA双链区上启动DNA的合成 E．形成的新生链与模板完全互补配对
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13. 下列有关DNA自动测序仪自动进样器区功能的叙述中，正确的是（ ）
A．毛细管进入样品盘标本孔中进样依靠自动进样器的移动完成 B．电极和毛细管一般均固定不动
C．DNA分子在毛细管中泳动的动力来自于两级间极高的压力差 D．电极为电泳的正性电极
E．样品盘有48孔和96孔两种，可一次性连续测试48或96个样本 14. 下列有关DNA自动测序仪凝胶块区功能的叙述中，正确的是（ ）
A．电泳时缓冲液阀打开 B．电极为电泳的负性电极
C．在分析每一个样品前，泵自动冲掉上一次分析用过的胶，灌入新胶 D．注射器驱动杆可给注射器提供正压力，将注射器内的凝胶注入毛细管中 E．玻璃注射器可储存凝胶高分子聚合物以及在填充毛细管时提供必要的压力 15. 下列有关缩微生物处理器结构和功能特点的叙述中，正确的是（ ）
A．基本结构为2层玻璃薄片和2层聚二甲基硅氧烷薄片 B．其形状为圆盘状，直径仅10厘米 C．可完成纳升级标本的Sanger DNA测序
D．微瓣膜的功能包括在热循环反应时封闭反应小室，为反应提供封闭的空间 E．毛细管电泳通道由上下来回迂回的U型管道构成，总长度为30cm
三、问答题
1．简述双脱氧链末端终止法测序原理。 2．简述多色荧光标记引物法的原理。 3．简述多色荧光标记终止底物法的原理。
4．荧光标记引物法和荧光标记终止底物法有哪些不同之处？ 5．多色荧光标记DNA的检测原理是什么？ 6．多色荧光标记DNA的检测有哪些优点？
7．与同位素标记相比，荧光标记在DNA测序中有哪些优点？ 8．简要介绍介绍全自动测序仪的基本结构。
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9．简要说明DNA自动测序仪检测区基本结构及功能。
10．毛细管电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，常见的原因是什么？ 11．导致毛细管电泳型DNA测序仪电极弯曲的常见原因是什么？ 12．毛细管电泳型DNA测序仪电泳时产生电弧，常见的原因是什么？ 13．简述平板电泳型DNA测序仪的常见故障及维护。 14．简述全自动DNA测序仪主要应用于哪些方面？ 15．简述蛋白质测序仪的结构及其各部件的功能。 16．简述蛋白质测序仪的主要应用。
17．简述缩微生物处理器的检测原理及其特点。 18．简述蛋白质测序仪的工作原理。
习 题 参 考 答 案
一、名词解释
1．荧光标记引物法：将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5?端，称为荧光标记引物法。 2．荧光标记终止底物法：将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上，称为荧光标记终止底物法。
3．多色荧光标记引物法：是DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5?端，当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4种）标记引物。特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。
4．多色荧光标记终止底物法：是DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终止的同时，也使该片段3?端标上了一种特定的荧光染料。根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。
5．Edman降解法：是检测蛋白质一级结构的方法。在弱碱条件下，多肽链N末端NH2与PITC反应，生成PTC－多肽。在无水强酸如三氟醋酸的作用下，可使PTC－多肽形成ATZ衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。剩余多肽链可以进行下一次以及后续的降解循环。如此不断循环，可依次使多肽链的氨基酸逐一降解，形成ATZ衍生物。ATZ衍生物经水溶酸处理转化为稳定的PTH氨基酸。
6．Sanger双脱氧链末端终止法：是检测DNA序列的一种方法。其原理是利用PCR，但反应体系中除了dNTP外，还有ddNTP。ddNTP可掺入到正在延伸的DNA链中，但不能同后续的dNTP形成磷酸二酯
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键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。
7．平板电泳型DNA测序仪：为DNA测序仪的一种类型。平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间，聚合后厚度一般小于0.4mm或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳。它具有样品判读序列长（600bp～900bp）、一块凝胶板上可同时进行多个样品测序的优点。
8．毛细管电泳型DNA测序仪：为DNA测序仪的一种类型。将凝胶高分子聚合物灌制于毛细管中（内径50?m～100?m），在高压及较低浓度胶的条件下实现DNA片段的快速分离。
9．缩微生物处理器：是一种新型DNA自动测序装置。其基本结构为3层玻璃薄片和一层聚二甲基硅氧烷薄片，各层间紧密粘合形成圆盘状，直径仅10厘米。在这些薄片之间有各种反应小室、毛细管电泳通道和微瓣膜，可完成纳升级标本的Sanger DNA测序。
二、选择题
【A型题】
1．B 2．C． 3．E 4．D 5．C． 6．B 7．C． 8．E 9．A 10．D
11．D 12．E 13．C． 14．C． 15．C 16．B 17．B 18．C． 19．C． 20．D
21．E 22．A 23．D 24．D 25．D 26．A 27．A 28．E
【X型题】
1．BC． 2．BCE 3．ABC． 4．ABCD 5．ABCD 6．ABCD 7．ABCD 8．ACD 9．ABCD 10．BCDE 11．BDE 12．ABDE 13．ABE 14．ACDE 15．BCDE
三、问答题
1．简述双脱氧链末端终止法测序原理。
答：双脱氧链末端终止法测序原理是利用DNA的体外合成过程。反应体系中的核苷酸单体除了4种dNTP外，还有ddNTP。反应过程中ddNTP虽然可以与正在延伸的DNA链的末端形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中，但它们本身没有3?-OH，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。据此原理分别设计四个反应，每一反应中存在相同的DNA模板、引物、四种dNTP和一种ddNTP(如
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