细胞实验

实验一 细胞膜通透性观察

1.渗透作用：水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。

2.溶血：将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。 问答题

1、为什么所有带电荷的分子（离子），不管多小，都不能自由扩散？ 带电的物质通常同水结合形成一个水合的外壳，这不仅增加了它们的分子体积，同时也大大降低了脂溶性，因此带电荷的分子（离子），不管多小，都不能自由扩散。 2、为什么把红细胞放入葡萄糖高渗液中也会发生溶血？

将红细胞置于乙二醇、丙三醇、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中，分子进入红血细胞，导致水的摄入，使细胞膨胀、破裂发生溶血。

3、为什么把红细胞放入低渗或某些等渗的盐溶液中会发生溶血？ 将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。各种非电解质溶液，只要单位面积中所含的分子数相同，就具有相同的渗透压。将红细胞置于乙二醇、丙三醇、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中，分子进入红血细胞，导致水的摄入，使细胞膨胀、破裂发生溶血。

实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察

概念题

1、超活染色:体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

2、液泡系：在细胞内，凡是由膜所包围的小泡或液泡，除线粒体、质体外，都属于液泡系，包括圆球体。

3活体染色: 是指对生活有机体的细胞或组织能着色，但又无毒害的一种染色方法。 4圆球体：用活体染色的方法，而染不上中性红的小泡被称为圆球体。 问答题（每题10分）

1、为什么詹纳斯绿B能专一性地对线粒体染色？

由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的基团。 2、詹纳斯绿B能染死细胞吗？为什么？

不能,只有活细胞中线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，才能使使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色,而死细胞中的酶失活.

3、为什么活体染色剂一般应选择那些毒性小的碱性染料并配成较稀的溶液来使用？

既能显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

实验四 鱼肝细胞的分离

概念题

1、细胞黏着 2、细胞连接 3、细胞基质 问答题

1、在动物细胞分离实验中组织消化液为什么要加EDTA？

EDTA是一种化学螯合剂，它对细胞有一定的解离作用。一些组织，尤其是上皮组织，在生长过程中需Ca2＋和Mg2＋维持组织的完整性，EDTA从细胞生存环境中夺取这些离子，形成

螯合物，从而使细胞分离。因此可用EDTA来破坏一些细胞之间的连结，从而达到分离细胞的目的

2、分离动物细胞有哪些方法？分离动物细胞应该注意哪些事项？ 三种方法：机械分离法、循环灌注法、胰酶法

注意事项：1、注意无菌操作。2、注意低温下进行。3、机械处理会损伤肝细胞。 3、用于原代培养的动物细胞的分离，应该注意哪些事项避免杂菌污染？

无菌操作；配置的缓冲液需要做滤菌处理。

实验五 福尔根染色

福尔根反应：是专一显示DNA的一种染色法，包括水解和显色两个步骤：将脱氧核糖核酸用盐酸脱嘌呤，其暴露出的自由醛基可与Schiff试剂发生反应呈现出紫红色，此即福尔根反应。

组织化学反应：是利用某些试剂能够与待检物质的特有基团发生特异性结合，从而通过细胞中该试剂存在的部位和颜色（或沉淀）的深浅，间接地显示出待检组分的分布与含量。 问答题

1、在进行福尔根反应时，如果标本不经水解直接放入Schiff试剂中染色，会发生什么现象？为什么？

不会发生福尔跟反应而呈现出紫红色，脱氧核糖核酸酸解脱嘌呤，暴露出的自由醛基可与Schiff试剂发生反应呈现出紫红色，而没有经过水解的脱氧核糖核酸的醛基没有暴露出来。 2、在进行福尔根反应时，标本在HCl水解前，先用5%三氯乙酸90℃处理15min，其余步骤相同，会发生什么现象？为什么？

3、染色后用亚硫酸水漂洗有何目的？ 去除Schiff试剂

实验六 性染色质小体的观察

1、巴氏小体：是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。

2、雌性哺乳动物X染色体失活假说和剂量补偿效应：在正常女性细胞中仅可观察到一个巴氏小体，而正常男性细胞中无巴氏小体或仅有个别细胞中有不典型的巴氏小体。这是由于正常女性具有两条X染色体，而正常男性细胞仅有一条X染色体，女性细胞中的X染色体中其中一条染色体随机失活，从而形成了巴氏小体，以保证细胞中的能活跃进行基因表达的X染色体只有一条。

1、为什么巴氏小体一般出现在核膜边缘？ 在间期，巴氏小体复制时间比有活性的X染色体稍迟一些，被正在复制的常染色质推向细胞核的边缘。因此巴氏小体在间期常处于核膜的边缘。 2、巴氏小体在人类遗传学工作中有什么用途？

实验七、叶绿体的密度梯度离心

1、密度梯度离心：是将要分离的细胞组分小心地铺放在密度逐渐增加的、高溶解性的惰性物质（如蔗糖）形成的密度梯度溶液的表面，通过重力或离心力的作用使样品中的不同组分以不同的沉降速率沉降，形成不同的沉降带。

2、速度沉降：是在离心前将要分离的细胞匀浆物放置在蔗糖梯度溶液的上层，各种细胞组分根据它们的大小以不同的速度沉降，形成不同的沉降带，然后分别收集不同沉降带中的组分。 3、、等密度沉降：是细胞组分在连续梯度的高密度介质中经离心力场长时间的作用沉降或漂浮到与自身密度相等的位置，形成不同的密度区带。

问答题

1、在密度梯度离心提取叶绿体时，匀浆介质为什么选用0.25mol/L蔗糖？匀浆在低温下快速进行是何道理？

在离心条件下，叶绿体和比它沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组分沉到离心管底部，此法可以粗分或富集叶绿体。

2、在密度梯度离心提取叶绿体时，采用两种浓度的蔗糖溶液（50%和15%）制成梯度，分离的叶绿体是否纯净？试分析原因。

实验八 植物细胞原生质体分离及活力检测

原生质体:指采用机械或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞 。 问答题

1、分离原生质体的方法有哪些?各有什么优缺点？

原生质体分离的方法包括：1、机械法分离 缺点是：产量极低；应用的材料受限制；操作极费力。

2、酶法分离 酶法可在短时间内获得大量原生质体，缺点是：不纯的酶制剂所含杂质对原生质体可能有不同程度的毒害作用。

2、简述原生质体纯化的方法及原理。

植物原生质体的纯化的方法：1、离心沉降法：收集方便，但仍有杂质；2、漂浮法：原生质体浮于比重大、渗透压高的溶液表面。可以收集较纯的原生质体。将酶解的原生质体与蔗糖溶液（23%左右）混合。3、界面法：使原生质体处于两种比重不同的的溶液（如蔗糖、甘露醇）界面之中，可以得到较纯的原生质体。实验九 植物核仁组织区标本制作与观察 概念题

1、核仁组织区 2、空气干燥法 问答题

1、用银染法为什么只在核仁组织区显色？

染色的是与rDNA转录有关的一种酸性蛋白，Ag-NORs就是18S+28S核糖体基因（rDNA）的分布区。

2、肿瘤细胞和正常细胞的核仁，银染颗粒数量有无差异，说明什么?

实验十 差速离心分离线粒体

问答题

1、分析在差速离心的过程中每一步上清液的成分，以及涂片用詹纳斯绿B染色的结果；并比较线粒体在各组分中的相对浓度、纯度和活性等方面的差异。

2、分离出的线粒体立即用詹纳斯绿B染色或放置室温2h后再染色，两者着色是否有差异，为什么？

实验十一 水草细胞的胞质环流

概念题

1、胞质环流: 细胞质成薄层沿着细胞质膜围绕中央液泡以一定的速度和方向循环流动称为胞质环流。

2、胞质穿梭运动：是细胞质流动的另一种形式，它与环流不同，是向相反方向来回穿梭。 3、布朗运动：是悬浮在液体或气体中的微粒所作的永不停息的无规则运动。 设计题

1、 请设计一个研究金属离子对胞质环流影响的实验方案，写明实验目的、实验方法和可能

出现的结果

1.取清洁载玻片一片，在载玻片中央滴一滴蒸馏水，在载玻片近两端滴加Nacl溶液一滴，取鲜褐藻接近茎尖的叶片一片，截取接近叶脉的三部分放入这液滴中。 2.盖上盖玻片，在显微镜下观察比较载玻片两端与中央对照细胞中胞质环流现象，按下表记录实验现象。1min 5min 10min 15min 蒸馏水0.25mol/LNacl 0.50mol/LNacl.

3.15min后，用蒸馏水漂洗载玻片两端的叶片，在显微镜下观察，看胞质环流是否可以恢复。 2、你在实验中观察到细胞松弛素B和待测药剂对胞质环流产生什么样的作用。试运用已知的理论解释观察到的现象。

藻的原生质流动完全停止, 细胞松弛素B是肌动蛋白聚合的抑制剂，结合在F-肌动蛋白的正（+）端，阻止F－肌动蛋白的功能