31、基因工程的操作流程 1、分：分离目的基因
2、切：对目的基因和载体适当切割 3、接：目的基因与载体连接 4、转：重组DNA转入受体细胞
5、筛：筛选出含有重组体的受体细胞
6、表：目的基因在受体细胞中表达，受体细胞成长为基因改造生物 32、PCR技术的原理
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）原理类似于DNA的变性和复制过程，即在高温（93 ～ 95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～65℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍，PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增，经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增109倍以上，实际上一般可达106～107倍。
1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。
2.退火：是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段DNA片段。
3.延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按5’→3’的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。 35、
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