实验七 植物染色体标本的制备与观察实验报告

细胞及遗传学实验报告

陈香燕 201008030103 生科1

班

实验七 植物染色体标本的制备与观察

（一）实验目的

学习植物染色体标本的制备技术，掌握染色体的技术方法，了解染色体的生物学意义。

（二） 实验原理

植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。由于秋水仙素可以阻断细胞在分裂中期纺锤体（微管二聚体）的形成，以至于不能拉动染色体分开向细胞两极，因此可以使细胞分裂停止在分裂中期，再经过染色，压片，镜检之后便可观察到细胞的染色体形态。

（三）实验用品

一、 材料：蚕豆 二、 试剂

1. Carnoy固定液 2. 0.1%秋水仙素溶液 3. 1mol/L HCl 4. Schiff试剂

5. 亚硫酸水溶液（漂洗液） 6. Carbor fuchsin （卡宝品红）染液

配方1：原液A：称取3g碱性品红，溶于100ml 70%酒精中（此液可无限期保存）。

原液B：取10ml 原液A，加入90ml 15%石炭酸（苯酚）水溶液（两周内使用）。

染色液：55ml 原液B加6 ml冰醋酸和6 ml 37%甲醛（此液适用于植物原生质体培养中细胞核和核分裂的染色）。

配方2：取配方1中的染色液2~10 ml，加90~98ml 45%醋酸和1.8g山梨醇（此液适用于核和染色体的一般形态观察，具有广泛适用性）。

（四）实验方法步骤

1. 取材：将蚕豆种子培养在培养皿内的湿滤纸上，室温或28°C下发芽，待胚根长达1~2cm时，切取0.5cm长的根尖部分。 2. 预处理：将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下处理 3~4h。

3. 水解：把根尖投入预热的58~60°C 1mol/L热HCl中，恒温条 件下水解14~15min

4. 染色：倒去热HCl,滴加卡宝品红少许，染色5~10分钟。

5. 洗涤： 吸去卡宝品红试剂，用蒸馏水换洗2~3次，每次1~2min。除去残留染色液后加几滴45%醋酸。

6. 压片：用吸管从醋酸中吸取材料，置干净载玻片上，材料周围保留半滴45%醋酸，盖上盖玻片，其上放一片吸水纸。左手指压住吸水纸的左边，右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去，再用铅笔擦头从盖玻片上轻轻敲打，使细胞均用散开。 7. 镜检：把压好的片子放在显微镜下，先观察细胞分散状况和中期分裂相的多少，再检查分裂中期细胞中染色体是否完全散开。如若染色体分散不好而难以分辨和计数，可取下片子，平放桌面上，用手指隔着吸水纸在盖玻片上稍施压力，如果操作细心，用力适度，便可很容易得到染色体分散良好的压片标本，供观察，计数和照相用。

（五）实验结果 实验结果如图1所示。

（六）实验结果分析与讨论

结果分析：由上图实验结果可知，可以较清晰的看到根尖细胞核内的染色体，细胞分散均匀，形态完整，中期分裂相中染色体数目较齐全，说明本实验较成功，在实验过程中，第一次用 Schiff试剂染色，效果不够理想，可于水解后改用卡宝品红染色（5~10min）。获得上图的实验结果，这是由于卡宝品红具有染色快、着色深以及适用性广等特点，因此多数植物的根尖、幼芽、花药以及培养的细胞或愈伤组织，经卡宝品红染色，都能得到良

好的结果。

讨论：植物染色体标本的制备与观察的实验要获得成功，关键要注意哪几个问题?

1、要保证植物种子的发芽成功，即要注意室内温度在28°C内，给予适当充足的水分，不能让种子干涸死亡。若发芽条件不适宜，导致种子发芽结果不理想，会使根尖细胞分裂不旺盛，或没有分裂，最终实验将观察不到染色体，只能看到细胞的大致轮廓以及核的形态。 2、秋水仙素液的浓度要在0.1%之内，不能过浓或稀，处理时间在3~4小时，若处理时间不够长，则有可能使抑制纺锤体失败，导致不能成功看到形态清晰的染色体。

3、染色时，最好用卡宝品红进行染色，得到的效果比Schiff试剂染色效果好，染色时间应在5~10分钟内，时间不宜过长，否则使染色过深。观察不清楚染色体的形态。

4、压片时一定要注意不能留有气泡，否则影响镜检的效果，用铅笔擦头从盖玻片上轻轻敲打时，要用力适度，若用力过猛，则容易将盖玻片压碎，一定要细心的将盖玻片压在载玻片的材料上，赶走气泡，同时使细胞均用散开，若染色体分散不开或不完全则镜检时难以分辨和计数。

作业

验交压片标本1~2张，要求细胞互不重叠，能够进行准确技术和照相。