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两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响

：罗伟琼 李沈容 邹翠贤 罗小珍 朱美玲? 【关键词】 脐血?

【摘要】 目的 探讨不同离心条件下对脐血造血细胞回收率的影响。方法 运用6％羟乙基淀粉（HEＳ）沉降,二次离心法可离心脐血浓缩单个核细胞（MNC),此法具有不受标本体积大小的影响、无细菌污染的优点。结果 通过分析两种离心方现制备MNC时，离心力与MNC回收率有密切关系。结论 加大离心力可增加MＮC的回收率。?

【关键词】 脐血；造血细胞/单个核细胞;离心法；回收率

【Ａbｓtｒact】 Oｂjective To ｉnvestｉｇaｔe the efｆeｃｔ ｏｆ differｅnt ｃentrｉｆugａｌ meｔhods oｎ rｅturns—ratio of nonｕｃlｅar cｅll（MNC） in umbｉlicaｌ cｏrd bｌood。Methｏdｓ Afｔｅr sｅdimentated witｈ 6％ hydｒｏxｙｅtｈyl staｒcｈ(HES),ｔwｏ ceｎtriｆuｇatiｎg ｐroｃessｅs ｗas empｌoyｅd ｔo sepａraｔe aｎｄ concentrａｔｅ MNC，whｉch ｗaｓ ｎot affected by speｃimen vｏlｕme aｎd not lluted bｙ ｂacteriuｍ.Ｒesulｔs Therｅ wａs ｓｉｇficａｎｔ ｒｅｌaｔionsｈip beｔｗeen dｉｆferent centｒifｕgal foｒce and ｒecｏvｅry ratｅ ｏf MNC。Ｃonclｕsion Ｒecovery ｒａte oｆ MNC ｗiｌｌ iｎcreaｓe by increaｓｉng centrifugal force．

【Key worｄs】 fｅtａｌ bｌｏod;ｎonuｃlear cｅll；ｃｅntrifugatｉon;rｅtrieｖing rate

造血干细胞移植(HSCT)已经成为迄今为止医治各种恶性血液病、肿瘤、

遗传性疾病、重度放射病及重症联合免疫缺陷等顽症的最有效方法之一[1，２］,而采用脐血替代骨髓及外周血进行HＳＣT已成为近10年来HSＣT领域的最重大进展之一[2，3］。最初的脐血HSCＴ使用的均为未经分离的全血，这种全脐血移植虽然能减少造血干/祖细胞的损耗，但因含有大量的红细胞等成熟血细胞,不但给冷冻保存带来困难，同时还可能会给移植病人造成严重的不良后果。因此，对脐血库来讲，高效快速分离脐血造血细胞，对单个核细胞（ＭNC）进行分离浓缩，最大限度地降低其终体积显得尤为重要。这不仅涉及到尽量减低造血细胞的丢失问题，而且还牵涉到降低脐血库库容的成本问题。所以，探索出一种行之有效理想的分离方法就成了该领域研究的热点。为此,笔者做了一些探索，现报告如下.

1 材料与方法

1.１ 材料与仪器 6%羟乙基淀粉(ＨES)购自Duｎtpｈａｒma;无菌、无热源,含有ＡCD保养液三联采血袋（长春泰尔茂医用器具）；落地式低温离心机(SORVALL-PC3C plｕs）；血细胞计数仪：2％冰醋酸结晶紫染色，计数有核细胞数.?

1.２ MNＣ的制备方法?

1。２.1 脐血来源 ４0份脐血均无菌,采自市宝安区西乡人民医院妇产科，均为足月产，胎儿无窒息。供者均为身体健康、发育良好的非高龄产妇。

1.2.２ 分离提取 将采集的脐血留样１ml用计数仪将MＮC计数。参照脐血库操作规程［４］按６％HEＳ∶脐血=1∶5的比例加入,并充分混匀10min，两次离心法。第一种方法以1０℃ 430r/mｉn离心6mｉｎ做第一次离心；第二种方法以１０℃ 460r/min离心6min做第一次离心；利用三联袋将上层富含MNＣ的血浆及少许ＲBC移入转移袋内，去除剩余的ＲＢC，再次以1０℃

130０r/mｉn离心1２ｍin。去除上层血浆获得脐血有核细胞悬液18～２２ml,留样１ｍl计数ＭNC。

2 结果?

两种离心转速与离心时间见;两种离心方法制备ＭNC获得率的比较见表2。

－表２ （略）

3 讨论

脐血与骨髓及外周血相比有诸多优点[5～7］：富含更原始的造血细胞,增殖能力强；可进行ＨＬＡ 1~3个抗原不合的同胞或无关者的移植;单份脐血中的造血细胞量可满足65％的儿童(