/2=1。2+0。5/2+0。85
因此，在使用集光器时应注意下列各点：
1、 在原则上，集光器的镜口率应该与物镜的镜口率一致。通常集光器上公刻有最大镜口率的数什，如N、A。1。0，1。2，1。4等。
因此与各种不同镜口率的物镜配合作用时，应根据它的大小来调整，使两者的镜口率相等。例如油浸系物镜的镜口率为1。25，欲使集光器的镜口率与它一致。其调节方法如下：
（1）按显微镜的一般操作过程调整焦点； （2）将集光器下的光圈开大；
（3）拨出目镜，一边看着视野，一边慢慢缩小光圈，直到能在视野中看到光圈边
缘形成的黑圈为止。这时，再逐渐开大光圈，到光圈边缘与物镜边缘一致时就停止。这样集光器的镜口率与物镜的镜口率就一致了。有些研究显微镜上的虹彩光圈框一刻有表示口径的标尺，可预先测定各种物镜镜口率与集光器镜口率一致时的分度，使用时对准这个分度即可。
2、 集光器镜口率在1。0以上时，要用香柏油浸没在集光器上面的透镜与载玻片之间，以便使高倍镜发挥应有的能力。
3、 用油浸系物镜观察标本后，若再用干燥系物镜观察时，须将载玻片上面的油擦净，但不必擦掉集光器上面的油，不过光圈要缩小些。
4、 若照明光线过强时，可以降低集光器或缩小光圈，但都会减低显微镜的分辨能力。所以在有必要调节光线强度时，最好是改变电灯亮度，或利用深色滤光玻片或增加滤光玻片的数目。
5、 若被检物体为活体标本或未染色的标本时，则需缩小集光器下的光圈。因为这时照明的光束愈狭小，明暗的对比愈明显。但为了减少物镜分辨力的降低，必须加强照明光线的强度。
6、 若观察普通的染色标本时，也应根据标本的性质和观察对象的不同，来改变照明方法。所以有关集光器、虹彩光圈和反射镜的用法，必须依照当时的具体情况来决定，一定要灵活运用，不能固定不变，这点必须牢牢记住。
第三节显微镜的使用及其注意事项 一、显微镜由以下各部分组成：
1、目镜。目镜在显微镜的最上部，插入在抽管的上端。
2、 抽管。抽管很光滑，插入在镜筒之内，两者紧密联系在一起，也可以上下抽动，以调节光学筒长的长度，以适应各种不同物镜和盖玻片的厚度，但在一般情况下，它的长度是固定的。
3、 镜筒。被固定在能转动的支架和齿条上，由粗调焦轮操纵着它的升降，并辅助以细调焦轮。两者的功能都是为了在镜检时调整焦点时使用。
4、 物镜。物镜装在镜筒的底部，由螺齿旋转在上面。有的显微镜只有一个物镜，但一般显微镜的镜筒底部装有一个转换盘，在它的下面装有2、3或4个物镜。
5、 镜臂。显微镜的主要支架是镜臂或称执手。它由倾斜面关节与镜柱及镜座或称镜脚连接在一起。在使用时，可以保持垂直的位置，也可以倾斜，但应限制其倾斜度不超过30度。
6、 镜台。镜台或称载物台约位于显微镜的中部。在它的上面放置切片标本，恰好与镜筒的长轴成直角。在载物台上，有的装有两个金属制成的压夹，用以固定切片标本，有的装置标本推动器，将切片标本固定后，能向前后左右推动。有的推动器上还有刻度，可以计算标本推动的距离和确定标本的位置。
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7、 照明装置。在载物台下装有一套照明装置，即集光、虹彩光圈和反射镜。三者联成一组，均固着在支架及齿条上，由齿轮控制它的上下升降。集光器的用法，见第二节。 8、 虹彩光？在集光器之下为虹彩光？
9、 反射镜。反射镜有两个面，即平面镜与凹面镜。在镜检时，最简单而常用的照明法是使光线（日光或灯光）投射至反射镜上，然后由此再反射经过载物台中央的圈孔，再透过透明的物体，在调节反光镜方向时，要一边看视野，一边调整反射镜的方向，以找到视野最明亮、光度最均匀的位置为最适宜。没有集光器的显微镜，在使用低倍物镜时可用平面镜，用高倍物镜时则用凹面镜。如有集光器，一般都要用平面镜，特别是使用油浸系物镜时更应如此，但亦有例外，在微弱光线下，有时不得不用凹面镜。
10、 在镜检时，都需要有光源，这也是显微镜系统的一个主要组成部分。光源有二：自然光源与人工光源。日光（非直射光）是一种很好的光源，平常在实验室中部利用之。但由于天气阴情不定，光线的强弱经常变化，所以在一般实验室也可安装简易的人工光源。用普通照明用的日光灯安装在一条木板上，放在显微镜前，同时由几个人使用，非常方便。如为研究显微镜或显微镜照相，则可用显微镜灯。 二、显微镜使用时的注意事项
显微镜是一种结构很精密的仪器，在使用时必须十分小心，切忌粗暴。其注意事项如下：
1、为了保持显微镜各部分的功能，必须尽量避免潮湿和灰尘，否则就会影响镜头和各个活动部分的使用。因此，须经常备有一块纱布和一块绒布或绸子。前者用来拭去金属部分的水分，潮气或尘土等；后者用来拂去光学系统的光学玻璃部分的灰尘。在气候潮湿的地区，应用显微镜的箱内放氧化钙或砂胶片，保持干燥、防止发霉，但应注意失效后须立即更换。
2、灰尘不仅会妨碍观察，也会影响转动部分移动的速度。多余的滑润油必须从镜子上擦去。否则灰尘与油脂粘在一起会粘住转动部分，并能擦伤齿条或其它部分。擦拭镜头的灰尘时，应先用绸子将灰拂去，再以拭镜纸轻轻擦拭，以免磨损镜头。 3、显微镜不用时应放置在箱中。如镜子固着在一定位置不但拆卸装箱时，须用玻璃罩或塑料布罩起来。
4、用油浸系镜头后，应用试镜纸蘸二甲苯少许，将镜头上残留的油擦净，如果不及时擦掉而久留在镜头上，干后就不易擦去，且易损伤镜头。
5、应防止震动和暴力，否则会造成光学系统没轴的偏斜面影响观察，看不清物体。搬动显微镜时，应一手托镜座。观察时，显微镜应放在离桌边10厘米处。
6、标本推动器必须移动顺利、灵活。如发现推动时有阻滞现象，应在滑动部分涂一些优等滑润油，如钟表油，使它恢复原样。
7、粗、细调焦轮必须经常保持转动顺利灵活，应无滑动或停滞现象。如果注入滑润剂过多，就会使轴承粘住，转动不灵活当然更应避免灰尘的浸入。如果发现对准焦点后，不久映象又模糊不清，这就说明镜筒有下滑现象，应立即检修。
8、使用时，不要用手摸光学玻璃部分。对光学系统尤应注意，切不可使用暴力。如镜头、集光器、虹彩光？和反射镜等都是比较脆弱的物质制成，用力过猛就分造成损伤。在开闭虹彩光？时，更应小心轻放。
9、在镜检标本时，道德应将镜筒向上升，然后转动转换盘，使低倍镜对准标本，同时在旁观察，再用粗调焦轮向下旋至镜头将靠近熏玻片时就停止。然后观察显微镜视野，并将粗调焦轮向上旋使镜头逐渐离开标本，到物体被观察清晰为止。这样操作就不会压啐盖玻片和标本。若反其道而行之，对初学者来说，容易造成压碎熏玻片的事故。用高倍物镜观察时，也必须先从低倍物镜中找到需要观察的标本后，再的换高倍镜。
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10、 化学试剂很容易沾污光学玻璃，使它晦暗变色。有些化学试剂的蒸汽也易氧化镜头。所以须将光学玻璃保护好，避免和化学试剂或药品接触与靠近。在存放之前，必须擦拭干净。物镜的里面不易清洁，可用毛笔拂拭，切示可用手指触及玻璃。镜头外面可用拭镜纸蘸二甲苯少许擦拭。二甲苯不能用得太多，否则浸入镜头后会使透镜松开。因镜头中的透镜系由树胶粘合的二甲苯浸入后树胶就易溶化。 11、 不要把目镜从抽管中取出，否则就会灰尘落入到物镜的背面，不易清除。如果必须将目镜取出时，应立刻用布或其它物品把它盖好。
12、 油浸系物镜一定要在盖玻片上滴油后才能使用。用毕须立即将油擦净。在油浸系物镜使用前，也必须先从低倍镜中找到被检物体后，再换高倍镜，调正焦点，并将被检物移到视野中心，然后再换油浸系物镜。此时绝不能用粗调焦轮，只准许用微调焦轮调正焦点。如熏玻片厚度过厚，就不会聚焦，应注意，否则就会压碎标本。
13、 载物台下的照明装置向下旋时，不要过度，否则有些镜子没有防止下滑的装置，就会使集光器等滑下来，同时，也不要升得太高，致使集光器与载玻片接触。特别是使用油浸系物镜时，要防止三者（集光器、载玻片和油镜头）碰头而造成损伤。
第四节 各种显微镜 一、暗视野显微镜
它与明视野显微镜的结构基本相同，只是在集光镜之下安了一个特殊装置，使光线改变途径，斜射投向被检物体，利用被检物体折射光或衍射光而形成明亮的图像。因此，在暗视野显微镜下只能观察到物体的存在，运动及外部形态，而不能分清其内部结构。 暗视野显微镜的优越性在于能观察到明视野显微镜观察不同的极其微小的物体，分辨率可达0。02—0。0004微米。故有人又把暗视野显微术称为“超显微术”。 二、相差显微镜
因为人眼只能在光波的波长（颜色）和振幅（亮度）有变化的情况下，才能在显微镜下看到被检物体的存在，但活的生物体多是无色透明的，当光线通过时，波长和振幅变化不显著，这样在普通显微镜下就难以观察清楚。相差显微镜就是利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，从而使无色透明的物体成为清晰可见。 相差显微镜与普通光学显微镜最主要的不同点是在聚光镜的下方装有环状光？，在物镜的后焦点平面处装有相板以及一个合轴调正望远镜。由于反差是以样品中的密度判别为基础形成的，故相差显微镜的样品不需染色，可以观察活细胞，研究一些大细胞器，如核、线粒体等的动态。 三、荧光显微镜
利用人眼不可见的一定波长的紫外线照射被检物体，使之受激发后而产生人眼可见的荧光。这是在光镜水平对特异蛋白质等生物大分子定性定位的最有力的工具，荧光显微镜在装置上的重要部件就是要有能提供充分的特定波长的光源的装置，使被检物体得到理想的激发而发出强的荧光。为了提高镜检效果，对聚光镜、载波片、盖玻片和物镜均有一定的要求。
四、 共焦点激光扫描显微镜
荧光显微技术有其局限性，比如固定剂常会破坏抗原性，包埋剂常常产生自发荧光，使信噪比降低。尤其是许多来自焦平面以外的光使观察到的图像反差和分辨率降低。共焦点激光扫描显微镜在某一瞬间只用很小一束光照明，通过检测器前的一个小孔或裂缝成像，从而保证只有来自该焦平面的光成像，焦平面以外的散射光则被小孔或裂缝挡住。这样所成的像异常清晰，分辨率比普通荧光显微镜提高1。4—1。7倍。所谓共焦点是指
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物镜和聚光镜同时聚焦到一个小点，它们互相共焦点。由于每次所观察的焦平面可以改变，也就是说可以对样品内部的不同平面进行扫描观察，获得一系列不同图像，然后用合适的软件重构出样品的三维图像。共焦点显微镜在从原位染色体研究到亚细胞结构的荧光检测方面的应用越来越广泛。 五、偏光显微镜
就是将普通光改变为偏振光进行镜检的方法，以鉴别某物质是单折射性（各向同性）或双折射击性（各向异性）。偏光显微镜是最重要的部件是偏光装置一起偏器和检偏器，前者装置在光源与被检物体之间，又称“起偏镜”；后者装在物镜与日镜之间，也叫“检偏器”。
双折射是品体的基本特征，因此，偏光显微镜被广泛地应用在矿物，化学等领域。在生物学研究中，也会遇到很多具有双折射性的结构，这就需用偏光显微镜进行区分。例如在植物学方面鉴别染色体、淀粉粒、细胞壁与细胞质以及组织中是否含有晶体等。在人体及动物学方面，常用于鉴别骨骼、牙齿、胆固醇、神经纤维、肿瘤细胞、横纹肌和毛发等。
六、微分子干涉显微镜
利用偏光干涉原理成像。从起偏镜射出的直线偏振光通过分光束器件后，分解为偏振方向互相垂直的两种直线偏振光，经聚光镜后射向被检物体并发生切变—横向偏移90度。两种光通过物镜后经分光束器件处理重新相遇，再通过检偏镜将两束光的振动投影到同一方向时才发生干涉。这样，样品中厚度上的微小差别就会转化成明暗区别，增强了样品反差并且具有很强的立体感。
微分干涉显微镜适用于研究活细胞中较大的细胞器，如核、液泡等。显微电影就是将微分干涉显微镜接上录像机的，可以观察活细胞中的颗粒及细胞器的运动。 七、倒置显微镜
与普通显微镜相比，物镜、聚光镜和光源的位置均颠倒过来，故称为“倒置显微镜”。其目的是使物镜和聚光镜的工作距离加长，以便能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究，适应生物学，医学以及工业中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护以及食品检验灯工作的需要。
到目前为止，倒置显微镜的最高放大率为40倍，这是因为在光学设计中无法同时解决大数值孔径和长工作距离的要求，普通显微镜40倍物镜的工作距离可达55毫米。 八、万能研究用显微镜
所谓“万能显微镜”，是指大型多用途、附件齐全、光学部件高级联机使用的显微镜，而且都是光、机、电的三结合体。万能研究用显微镜，除明视野外，均能作暗视野、相差、偏光、微分干涉和荧光显微术。装有自动摄影装置，还附有高分辩率投影屏、描绘器、共览、电视有电影摄像等装置。新型的万能研究用显微镜的自动化程度较高，由微机控制。常见的品牌有日本的尼康和欧林巴斯、德国的欧波同和莱兹。
第二章 显微镜的几种常用附件 第一节 游标尺的使用
游标尺在普通显微镜上常锈刻在载物台上的推动器上，研究用显微镜多镌刻在载物台的纵横边缘上，它的作用有二： 1） 可粗放测量被检物的大小或长度； 2） 观察被检物体时，如发现其要点，可将纵、横座标刻度记在制片的标签上，待以后镜检时，只要按所记刻度进行观察，随即在视中被找到。 游标尺的读法：游标尺由主标尺和副标尺两部分组成。主标尺每小格为1毫米的分度，读数为1毫米；副标尺一般分10小格，每小格等于主标尺每小格的9/10毫米的分度，读数
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