AC标?A样（1）吸光系数法：C? （2）对照法：C样?A标E?l
例1 有一浓度为1.00×10-3 mol/L的有色溶液，在一定吸收波长处，于0.5 cm的吸收池中测得其吸光度为0.532，如果在同一吸收波长处，于同样的吸收池中测得该物质的另一溶液的百分透光率为20.0%，则此溶液的浓度为多少？ A0.532????1064 ?3cl1.00?10?0.5
?lgT?lg0.200c????1.31?10?3mol/L
?l1064?0.5
例2 已知苯胺B带的λmax为280nm，ε为1430。精密称取含有苯胺的样品0.500g，用无水乙醇溶解配制成100mL溶液，精密量取10.0mL用相同溶剂稀释至100mL，用1cm的比色皿测得280nm处的A为0.430。求样品中苯胺的质量分数。（M苯胺=93.128）
M% ???E11cm10
1430?101% E1(标)??153.6cm93.128
A0.430 c???0.00280g/100ml苯胺（稀释样）1ácml153.6?1
100 m?苯胺（稀释样）m10?100%?0.00280?10?100%?5.60% w苯胺?苯胺（原样）?100%?m原样m原样0.500
例3：维生素B12的水溶液在361nm处的E1cm1%值是207，盛于1cm吸收池中，测得溶液的吸光度为0.414，则溶液浓度为： C = 0.414/(207·1）=0.002g/100ml
例4：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？[ E1cm1%(361nm) = 207]
A0.5070.507
E计算????202.80.025 C0.0025100
?10.009
E计算 202.8B12%??100%??100%?97.97% E标准207
三、色谱法概论
例：在Apiezon L柱上，柱温100?C，用正庚烷及正辛烷为参考物质对，测定乙酸正丁脂的保留指数。
测定结果： t0 = 30.0?、 tR(正庚烷) = 204.0 ?
tR(乙酸正丁脂) = 340.0 ? 、tR(正辛烷) = 403.4 ?
I?100[7?1?lg310.0?lg174.0?775.6lg373.4?lg174.0说明：乙酸正丁脂在Apiezon L柱上的保留行为相当于7.756个碳原子的正构烷烃的保留行为。
例1：在2m，5%阿皮松柱，柱温100?C ,记录纸速为2.0cm/min的实验条件下，测得苯的保留时间为1.5min，半峰宽为0.20cm。求理论塔板高度。 W1/2 = 0.20/2.0 = 0.10min
n = 5.54( 1.5/ 0.10)2 = 1.2?103 H = 2000mm/1200 = 1.6 mm
例2. 用15cm长的ODS柱分离两个组分。柱效n = 2.84?104m-1；测得t0 = 1.31min；组分的tR1 = 4.10min；tR2= 4.38min。求k1、k2、?
t?t?t4.10?1.314.38?1.31?2.13 k2??2.34 k1?R?R10?t0t01.311.31 4k22.34n?2.84?10?0.15?4260 ????1.10
k12.13
例3：从40cm长的填充气相色谱柱上测得如下表数据： 化合物 保留时间/min 峰宽/min
空气（不保留组分） A 2.5 10.7 1.3 B 11.6 1.4 10
?
求：(1) 理论塔板数n的平均值；(2) 分离度；(3) 为使A、B两峰完全分开，需要的理论塔板数是多少？色谱柱至少多长？。
解：(1) n??t22RA?A?16????16???10.7???1084?1.08?103
?wA???1.3? n??t22RB?B?16????16??11.6??10983
?w????1.10?10B??1.4?
1.08?103?1.10?103n??1.1?103 2(2) R?2(tRB?tRA)2?(11.6?10.7) w?w??0.67AB1.3?1.4
(3) 要使A、B两峰完全分离，R值必须≥1.5
R?n??1k24???k2?12n???4R?(1?k22)??4?1.5?1.11?(1?3.64)??(??1)k????5957?2??(1.11?1)?3.64??6.0?103L1n1L1L?L??n2n?40?6.0?1032?218cm?2.2m2n211.1?103 11
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