菠菜叶中DNA的提取

中央民族大学生命与环境科学学院 化学综合性设计实验报告

菠菜叶中DNA的提取

Extract DNA from the leaf of spinach

年 月 日

菠菜叶中DNA的提取

马鹏举

（中央民族大学 北京 100081）

摘要：采用CTAB方法从菠菜叶片中提取DNA,通过琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA进行定性分析和综合比较。研究提取缓冲液用量、水浴时间、蛋白质沉淀剂(氯仿-异戊醇)用量、DNA沉淀剂(异丙醇)用量等条件对DNA提取效率和纯度的影响。

关键词：菠菜叶 基因组DNA提取 DNA检测 提取方法 琼脂糖凝胶电泳法

Extract DNA from the leaf of spinach

MA Peng- ju

Minzu univercity of China，Beijing，100081

Abstract：Using CTAB method to extract DNA from spinach leaves, through agarose gel electrophoresis of DNA extracted by the qualitative analysis and comprehensive comparison. Study extraction buffer

consumption, water bath time, protein precipitator (chloroform, isoamyl alcohol) dosage, DNA precipitation agent (isopropyl alcohol), such as the dosage of DNA extraction efficiency and the influence of purity

Keywords: Spinach leavesGenomic DNA extraction DNAtesting Extractionmethod Agarose gel electrophoresis

前言

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中为尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，主要采用CTAB方法，其他的方法还有物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法；化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法；生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等。

1. 实验材料和方法

1.1仪器

微量移液器、台式高速离心机（20000r/min）、高压灭菌锅、常用玻璃仪器及滴管、10ml离心管、研钵、凝胶成像分析系统、琼脂糖凝胶电泳系统

1.2材料

菠菜叶

1.3试剂[1]

CTAB溶液（ CTAB—20g/L ，NaCl—1.4 mol/L，EDTA—10 mmol/L，Tris—100 mmol/L，pH 8.0）

TE 缓冲液（EDTA——1 mmol/L，Tris——10 mmol/L，pH 8.0）

氯仿，异戊醇，巯基乙醇，苯酚，异丙醇，液氮，无水乙醇

1.4方法[2]

（1）将CTAB分离缓冲和巯基乙醇液置于65℃水浴中预热；

（2）称取菠菜叶1g，置于的研钵中，倒入液氮，尽快研碎，在液氮挥发完后停止研磨；

（3）取适量粉末加入10ml的EP管中，加入1ml预热的CTAB分离缓冲液中，轻轻晃动使之混匀；

（4）样品于65℃水浴中保温40分钟，并在保温过程中不断摇晃；

（5）冷却2min后，加入1ml的酚-氯仿-异戊醇（25：24：1），充分震荡，使两者混合均匀，4℃ 12000 r/min离心10 min；

（6）取上清液至10 mL的离心管中，加入2ml的氯仿-异戊醇（24：1），轻轻颠倒离心管，混匀，4℃ 12 000r/min离心10 min；