三、Navigator 界面
Import:导入一个文件 Export:导出一个文件
Batch Import:导入一批数据 Batch Export:导出一批数据 New:新建一个实验或文件夹 New Folder:新建一个文件夹 Open:打开一个文件 Rename:重命名
Delete:删除选中的目标 Copy: 拷贝选中的目标
Note:所有上述图标在深蓝色时为激活状态,灰色时为灭活状态也就是不可用状态。
各图标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备。
软件操作
一.打开软件
打开电脑,Windows操作系统的用户名为operator,密码为LC480(区分大小
写),电脑操作系统启动完毕,检查电脑右下角是否有
图标。如果没有,点击桌面
“Exor4 for XDMS_R”快捷方式文件。然后右键点击图标,左键点击“Show”一
栏,如最后一句话显示“Exor 4 server is running”表示数据库加载成功。如果显示“Exor 4 failed to start”则表示数据库没有加载上,关闭该窗口,右键点击图标,选
“Shutdown”一栏,退出数据库,重新点击桌面“Exor4 for XDMS_T”文件,加载数据库。
然后点击桌面“LightCycler480 Software”快捷方式文件,运行该软件。
输入用户名和密码。用户名默认为admin(管理者权限),密码为LightCycler480(区分大小写),如用户已经建立新用户名,则可以按照新用户名登录。
二.用户管理
为了实验结果的有效管理,可以建立不同级别的用户。
如: 标准用户(Standard User)、专业用户(Expert User)、管理者(Local
Administrator)。一般实验室建议建立专业用户(Expert User)用户名,然后以该用户名登录软件进行实验操作。
建立新用户操作:打开LightCycler480 操作软件,点击右侧按钮打开“Tools”工具栏,选择“User Access/Users and Groups”选项。在右边窗口中点击“New User”键,在右边“Enter the user’s full name”一栏中填写用户的全名,在“”Enter the name the user wants to log in as”一栏填写用户登录名,在“Enter the user’s password”一栏中输入密码(密码须含有6个以上字母,1个以上数字,其中有至少一个字母大写),在“Confirm the password”一栏中重新输入一次密码,加以确认,在“Select the user’s role”一栏中选择用户级别,然后点击右下方“Close”按钮加以确认。
在
“Tools”工具栏中的“System Settings”界面中可以设置各用户级的权限,
以及密码的时效。
三.仪器自检
每次开机时,仪器会自动进行初始化自检程序。自检通过,仪器左侧指示灯变绿。
如放置了样本,仪器右侧指示灯变绿。在自检时,不能放置反应板,否则自检无法通过。
四.建立实验程序
打开LightCycler480 操作软件,成功登录后点击
按钮,进
入New Experiment/Run Protocol程序设置界面。在“Detection Format”一栏中选择所使
用的荧光检测技术,可选择各类探针和染料,如常见的SYBR Green I染料、Mono Color Hydrolysis Probe单色TaqMan水解探针、Multi Color Hydrolysis Probe多色TaqMan水解探针。
在进行多色荧光PCR实验时,须点击点击“√”确认。
按钮选择用户所采用的荧光检测通道,
在一栏中填写反应体积。
在“Programs”界面中设置实验程序:在“Program Name”下方命名程序,“Cycles”一栏内填写该程序的循环数,在“Analysis Mode”一栏选择该程序的分析模式。定量分析选择“Quantification”,溶解曲线分析选择“Melting Curves”,颜色补偿实验选择“Color Compensation”。
而后在“Temperature Targets”界面内设置所指定程序的内容,在“Target(℃)”处填写目标温度,“Acquisition Mode”处选择信号采集方式,“Hold”一栏填写该温度所持续的时间,“Ramp Rate(℃/s)”处填写升降温速率(注:如目标温度为50℃以下时,为了减少硬件的损耗,必须将降温速率调至1.5℃/s以下)。如一个程序有多个步骤,则在Temperature Targets界面的左侧处点击
,增加步骤;也可点击上下箭头
调整各步骤的先后顺序。如一个实验中有多个程序,也可在“Programs”界面左
侧点击,增加程序,也可点击上下箭头调整各程序的先后顺序。
实验程度设置完成后,在下方“Overview”界面内会自动生成温度随时间变化的温控曲线,以及估计的运行时间,绿色点表示采集荧光信号的温度和时间点。可以依照该图检查一下程度设置是否正确。
设置好的实验程序可以保存成模板文件,下次使用同样的实验程序时可以调用。具体操作如下:点击按钮右侧的下拉箭头,选中“Save As Template”选项,系统默认将实验程序模板文件保存在所登录的用户名下“Templates”目录中,用户可将其存放在其下的子目录“Run Templates”下,填写该程序模板文件的名称,点击“√”按钮即完成保存。调用模板程序时可点击“Apply Template”按钮,从目录树中选定所要调用的模板,点击“√”按钮确认。
五.样本设置
1、样本亚组编辑:LightCycler480软件拥有一个独特的样本编辑管理功能——亚组编辑(Subset Editor),即将反应板上所有的样本根据用户需要分成亚组,对亚组进行独立地分析定量。具体操作如下:
在“New Experiment”界面中,点击左侧
按钮,进入Subset设置界面,点击
按钮新建亚组,并给其命名。点击按钮可复制所选定的亚组,点击按钮可更改所选定亚组的名称,点击“Delete”按钮可删除所选定的亚组。设置亚组:在Subsets界
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