四国药典细菌内毒素对比 - 图文

方法能有效地排除干扰且不会造成内毒素的活性损失，要使用预先添加了USP内毒素RS再经过处理的供试品溶液进行干扰试验。 凝胶限度试验 CP(2015) 按表2 制备溶液A、B、C和D。使用稀释倍数不超过MVD并且已经排除干扰的供试品溶液来制备溶液A和B。 按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。 表2 凝胶限度试验溶液的制备 编号 A B C D 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 0/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/检查用水 0/检查用水 平行管数 2 2 2 2 注：A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为阴性对照。 结果判断保温60分钟±2分钟后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C 的平行管均为阳性，试验有效。 若溶液A 的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定。若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品符合规定，否则判定供试品不符合规定。 若供试品的稀释倍数小于MVD而溶液A出现不符合规定时，需将供试品稀释至MVD重新实验，再对结果进行判断。 EP(8.0) 按鲎试剂标示灵敏度复核试验项下有关形成含内毒素的坚实凝胶的说明进行操作，该法可检查供试品溶液的内毒素含量是否超出了内毒素限度。 （i） 方法 按表2.6.14-2制备溶液A、B、C、D。实验方法见（1）预备试验的（i）鲎试剂标示灵敏度的复核试验项。 表2.6.14-2 溶液 A 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 0/供试品溶液 平行管数 2 B C D 2λ/供试品溶液 2λ/BET检查用水 0/BET检查用水 2 2 2 制备溶液A、B（供试品阳性对照），稀释倍数不得超过MVD。按照（1）预备实验，（ii）干扰因素实验项下的说明开展实验。溶液B、C（阳性对照）所含标准内毒素的浓度为鲎试剂标示灵敏度的两倍。溶液D（阴性对照）为BET检查用水。 （ii） 结果判断 只有溶液B和C的平行管的试验结果均为阳性、溶液D的平行管的试验结果均为阴性时，试验方有效。 溶液A的平行管的试验结果均为阴性时，可判定供试品符合试验的内毒素限度要求。 如溶液的平行管的检查结果均为阳性时： - 如供试品的稀释倍数为MVD，供试品不符合规定。 - 如供试品的稀释倍数小于MVD，应将供试品溶液稀释至较大但不超过MVD的倍数，再次开展实验。 若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。如复试中，溶液A的两个平行管均呈阴性，可将供试品判为符合内毒素限度要求。 USP(36) 方法——按表2制备溶液A、B、C、D。按凝胶法预备实验的LAL试剂标示灵敏度复核试验项下操作。以该四种溶液为一组试验的供试品，每组试验做两组平行。 表2 凝胶限量试验溶液的制备 溶液 A B C D 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 无0/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/LAL试剂用水 无/LAL试剂用水 平行管数 2 2 2 2 用稀释倍数不超过MVD的稀释液制备溶液A和供试品阳性对照品；制备方法见凝胶法预备实验的干扰试验项。阳性对照溶液B和C含有内毒素浓度为LAL试剂标示灵敏度的两倍的标准内毒素溶液。阴性对照溶液D为LAL试剂用水。 结果判断——只有阳性对照溶液B和C的平行管的试验结果均为阳性、阴性对照溶液D的平行管的试验结果均为阴性时，试验方有效。溶液A的平行管的试验结果均为阴性时，可判定供试品符合试验的内毒素限度要求。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，供试品不合格。 若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。如复试中，溶液A的两个平行管均呈阴性，可将供试品判为符合内毒素限度要求。若供试品溶液再小于MVD的稀释倍数下得到的试验结果为阳性，应将供试品溶液以更大的但不超过MVD的倍数进行稀释，再次开展试验。 JP(16) 按鲎试剂标示灵敏度复核试验项下有关形成含内毒素的坚实凝胶的说明进行操作，该法可检查供试品溶液的内毒素含量是否超出了内毒素限度。 （i） 方法 按表2制备溶液A、B、C、D。以该四种溶液为一组试验的供试品，每组试验做两组平行。 根据（1）预备试验项下的（ii）干扰因素试验的说明制取溶液A和B。孵育温度、孵育时间和形成凝胶的确认方法见（1）预备试验的（i）鲎试剂标示灵敏度的复核试验项。 表2 溶液 A B C D 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 0/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/BET检查用水 0/BET检查用水 平行管数 2 2 2 2 （ii） 结果判断 只有溶液B和C的平行管的试验结果均为阳性、溶液D的平行管的试验结果均为阴性时，试验方有效。 溶液A的平行管的试验结果均为阴性时，可判定供试品符合试验的内毒素限度要求。 若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。如复试中，溶液A的两个平行管均呈阴性，可将供试品判为符合内毒素限度要求。 以MVD稀释的溶液A的两个平行管均为阳性时，供试品不符合内毒素限度要求。若供试品溶液再小于MVD的稀释倍数下得到的试验结果为阳性，应将供试品溶液以MVD倍数进行稀释，再次开展试验。 凝胶半定量试验 CP(2015) 本方法系通过确定反应终点浓度来量化供试品中内毒素的含量。按表3制备溶液A、B、C和D。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。 结果判断若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，系列溶液C的反应终点浓度的几何平均值在0.5-2λ，试验有效。 系列溶液A中每一系列的终点稀释倍数乘以λ，为每个系列的反应终点浓度。如果检验的是经稀释的供试品，则将终点浓度乘以供试品进行半定量试验的初始稀释倍数，即得到每一系列内毒素浓度c。 若每一系列内毒素浓度均小于规定的限值，判定供试品符合规定。每一系列内毒素浓度的几何平均值即为供试品溶液的内毒素浓度[ 按公式CE=antilg(∑c/2)]。若试验中供试品溶液的所有平行管均为阴性，应记为内毒素浓度小于λ(如果检验的是稀释过的供试品，则记为小于λ乘以供试品进行半定量试验的初始稀释倍数）。 若任何系列内毒素浓度不小于规定的限值时，则判定供试品不符合规定。当供试品溶液的所有平行管均为阳性，可记为内毒素的浓度大于或等于最大的稀释倍数乘以λ。 表3 凝胶半定量试验溶液的制备 编号 A 内毒素浓度/被加入内毒素的溶液 无/供试品溶液 稀释用液 检查用水 稀释倍数 1 2 4 8 1 1 2 4 8 － 所含内毒素的浓度 － - - - 2λ 2λ λ 0.5λ 0.25λ － 平行管数 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 B C 2λ/供试品溶液 2λ/检查用水 － 检查用水 D 无/检查用水 － 注：A为不超过MVD并且通过干扰试验的供试品溶液。从通过干扰试验的稀释倍数开始用检査用水稀释至1倍、2倍、4倍和8倍，最后的稀释倍数不得超过MVD。