分子生物学试题1

2.细胞内第二信使包括哪些物质?它们是怎样产生的,有何作用? 3.PCR和细胞内DNA复制两者有哪些主要的相同点和不同点?

本科生分子生物学试卷（二）参考答案

一、选择题，选择一个最佳答案（每小题1.5分，共30分） 1.D；2.B；3.A；4.A；5.A；6.C；7.C ；8.C ；9.B； 10.E 二、填空题（每题1分）

1．质粒DNA具有三种不同的构型分别是：（ SC构型 ）、（ oc构型 ）、（ L构型 ）。在电泳中最前面的是（ SC构型 ）。

2.哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是（ TFIID ）、（ SP-1 ）和（ CTF/NF1 ）。

3. 与DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与DNA结合的功能域常见有以下几种（ 螺旋-转角-螺旋 ）、（ 锌指模体 ）、（碱性-亮氨酸拉链模体 ）。 4. 转基因动物常用的方法有：（逆转录病毒感染法）、（DNA显微注射法）、（胚胎干细胞法 ）。

5. RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E他们的结合顺序是： （ D、A、B、E ）。其中TFII-D的功能是（与TATA盒结合 ）。 三、简答题（每题5分，共40分） 1.衰减子

答案要点：在色氨酸操纵子中，当mRNA合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，否则，转录总是在长162bp的前导区终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录，因为转录终止发生在这一区域，并且这种终止是被调节的，这个区域被称为衰减子。 2.DNA拓扑异构酶

答案要点：DNA在细胞内往往以超螺旋状态存在，DNA拓扑酶催化同一DNA分子不同超螺旋状态之间的转变。DNA拓扑异构酶有两类，大肠杆菌的ε蛋白(MW-110000)就是一种典型的拓扑异构酶Ⅰ.它的作用是暂时切断一条DNA链，形成酶-DNA共价中间物而使超螺旋DNA松弛化，然后再将切断的单链DNA连接起来，而不需要任何辅助因子。而大肠杆菌中的DNA旋转酶(DNAgyrase)则的典型的拓扑异构酶Ⅱ，能将负超螺旋引入DNA分子，该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，同时需要ATP水解为ADP以供能。 3.基因表达

答案要点：遗传信息从DNA到RNA再到蛋白质的过程。 4.前导肽

答案要点：分析色氨酸操纵子前导肽的序列发现，它包括起始密码子AUG和终止密码子UGA；如果翻译起始于AUG，应该产生一个14个氨基酸的多肽，这个假设的多肽被称为前导肽（实际上还没有观察到）。 5.启动子

答案要点：启动子是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。 6. DNA分子克隆技术 答案要点：（也称基因克隆技术） 在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或NDA片段的大量拷贝，有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构与功能，随着引入的DNA片段不同，有两种DNA库，一种是基因组文库（genomic library）,另一种是cDNA文库。 7.G蛋白

答案要点：受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白结合，使其释放活性因子，再与效应器发生反应。位于受体与效应器之间的则是偶联蛋白。目前所知的偶联蛋白种类较多，都属于结构和功能极为类似的一个家族，由于它们都能结合并水解GTP，所以通常称G蛋白，即鸟苷酸调节蛋白（guanine nucleotide regulatory protein）。

8.受体型酪氨酸激酶

答案要点：蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)是一组催化酪氨酸残基磷酸化的酶，他们通过从三磷酸腺苷上转移一个磷原子到酪氨酸残基上，而使底物蛋白活化. 目前，已发现PTK有100多个家族成员，他们通过活化底物蛋白，参与细胞的信号转导，最终，这些信号转导入细胞核内，引起某些基因表达水平的改变，使诸如细胞生长之类的复杂的细胞功能得以调节. 因此在调节细胞的分化、生长和激活中起到重要作用.根据PTK的结构，可分为受体型和非受体型PTK两大类，前者又称跨膜PTK，后者又称细胞内PTK. 生长因子受体PTK(受体型酪氨酸激酶或RTK): 这一类蛋白酪氨酸激酶为跨膜蛋白，其胞外部分为配体结合区，中间有跨膜区，胞内部分含有蛋白酪氨酸激酶的催化结构域. 根据他们的结构不同可分为，表皮生长因子受体(EGFR)家族、胰岛素受体家族、血小板衍生生长因子(PDGF)受体家族和成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族.

四、论述题（每题10分，共30分）

1. DNA与蛋白质相互作用研究方法及其原理？ 答案要点：1、凝胶阻滞实验； 2、DNaseI足迹实验。

原理参见朱玉贤高教（二）版《现代分子生物学》教材166~170页。 2.试述真核生物基因表达调控的一般规律? 答案要点：分为两大类：（一）瞬时调控或称可逆调控，它相当于原核细胞对环境条件作出的反应，包括某种底物或激素水平升降时，或细胞不同阶段中酶活性的调节；（二）发育调控或称不可逆调控，是真核基因调控的精髓部分，它决定了真核细胞生长、分化、发育的全部进程。根据基因调控在同一事件中发生的先后次序，又可将其分为转录水平、转录后水平调控。后者又进一步分为RNA加工成熟过程调控、翻译水平调控和蛋白质加工水平的调控。

3.细胞内第二信使包括哪些物质?有何作用?

答案要点：生物细胞的信号分子从溶解性来看又可分为脂溶性和水溶性两类。脂溶性信号分子，如甾类激素和甲状腺素，可直接穿膜进入靶细胞，与胞内受体结合形成激素-受体复合物，调节基因表达。水溶性信号分子，如神经递质、细胞因子和水溶性激素，不能穿过靶细胞膜，只能与膜受体结合，经信号转换机制，通过胞内信使（如cAMP）或激活膜受体的激酶活性（如受体酪氨酸激酶），引起细胞的应答反应。所以这类信号分子又称为第一信使（primary messenger），而cAMP这样的胞内信号分子被称为第二信使（secondary messenger）。目前公认的第二信使有cAMP、cGMP、三磷酸肌醇（IP3）和二酰基甘油（DG），Ca2+被称为第三信使是因为其释放有赖于第二信使。第二信使的作用是对胞外信号起转换和放大的作用。

本科生分子生物学试卷（三）

—.选择题(每题只选一个答案，每题1.5分) 1.有关DNA链的描述哪条不对

A.DNA是由很多脱氧单核苷酸形成的多核苷酸 B.DNA5’端是-OH基，3’端是磷酸 C.DNA一级结构的书写为P：pACTGAC D.单核苷酸之间通过磷酸二酯键相连

E.DNA的一级结构是指dAMP,dGMP,dCMP,dTMP的排列 2.有关DNA变性的描述哪条对？

A.DNA变性时粘度增加 B.变性时磷酸二酯键断裂 C.DNA变性温度的中点叫TmD.DNA变性时紫外吸收增加 E.DNA变性时280nm波长吸收增加 3.DNA聚合酶催化的反应

A.催化四种单核苷酸的聚合 B.需要DNA做引物

C.DNA聚合酶有种属特异性

D.产物DNA的性质取决于模板，与DNA聚合酶来源无关

E.沿着3’-5’方向合成

4.自然界中以DNA为遗传物质的大多数生物DNA的复制方式： A.环式 B.D-环式 C.半保留 D.全保留 E.散布式

5.真核细胞mRNA的加互修饰不包括：

A.除去非结构信息部分 B.在mRNA的3’末端加polyA尾巴 C.经过较多的甲基化过程 D.在mRNA的5’末端形成帽子结构 E.mRNA由核内不均一RNA转变而来 6.下列哪种氨基酸的密码子可作为起始密码子？

A.苯丙氨酸； B.酪氨酸； C.甲硫氨酸； D.S-腺苷蛋氨酸 E.以上均不是，而是TAG 7.翻译的起始不需要：

A.Met-tRNA B.mRNA模板 C.核蛋白体 D.起始因子 E.dGTP

8.下面哪些因素可防止DNA上的一个点突变表现在蛋白质的一级结构？ A.DNA的修复作用 B.密码的简并性

C.校正tRNA的作用 D.核糖体对mRNA的校正 E.以上都正确

9.关于氨基酰tRNA合成酶，哪项不正确？

A.有20种，对应于20种氨基酸 B.可使酶识别tRNA和氨基酸 C.有α及/或β亚基 D.疏基酶 E.借次级键与相应的氨基酸结合 10.真核基因调控中最重要的环节是：

A.基因重排； B.基因转录； C.DNA的甲基化与去甲基化； D.mRNA的半衰期； E.翻译速度； 二、名词解释(每题3分) 1．cDNA与cccDNA 2．CAP

3．回文序列： 4．micRNA： 5．核酶： 6．信号肽： 7．弱化子：

8．上游启动子元件： 9．DNA探针： 10．SD序列：

11．单克隆抗体： 12．顺式作用元件： 13．Klenow酶： 三.问答题

1. 激活蛋白（CAP）对转录的正调控作用？(12分) 2. 典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤？(12分) 3. 分别说出5种以上RNA的功能？ (11分)

4. 对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？ (11分)

本科生分子生物学试卷（三）

—、单选题(每题只选一个答案，每题1.5分)

1.E 2. B 3. D.4. C 5. A 6. C 7. C 8. E 9. A 10. B 二、名词解释(每题3分)

1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。

2．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ）

3．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 4．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 5．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。

6．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 7．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。

8．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA及增强子，弱化子等。

9．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。 10．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 11．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。

12．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。 13．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’ 3’外切酶活性 三.问答题

1. 激活蛋白（CAP）对转录的正调控作用？(12分)

答案要点：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMPactivated protein ）。当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培养基中时，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等启动子的功能。一些依赖于CRP的启动子缺乏一般启动子所具有的典型的-35区序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶难以与其结合。 CAP的存在（功能）：能显著提高酶与启动子结合常数。主要表现以下二方面：

①CAP通过改变启动子的构象以及与酶的相互作用帮助酶分子正确定向,以便与-10区结合，起到取代-35区功能的作用。

②CAP还能抑制RNA聚合酶与DNA中其它位点的结合，从而提高与其特定启动子结合的概率。 2. 典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤？(12分)

答案要点：a、提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形成一个新的重组DNA分子。 b、将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 c、对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 d、对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 3. 分别说出5种以上RNA的功能？ (11分) 答案要点：

转运RNA tRNA 转运氨基酸 核蛋白体RNA rRNA 核蛋白体组成成 信使RNA mRNA 蛋白质合成模板 不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA的前体 小核RNA snRNA 参与hnRNA的剪接

小胞浆RNA scRNA/7SL-RNA 蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分 反义RNA anRNA/micRNA 对基因的表达起调节作用 核 酶 Ribozyme RNA 有酶活性的RNA 4. 对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？ (11分)

答案要点：天然质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必须对之进行改造构建：