作为空白对照进行实验。
（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般来说，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 。
（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐 细菌，这种培养基被称为 。
6. （1）氮源 碳源 水 无机盐 （2）高压蒸汽灭菌法 （3）恒温培养箱 无菌水 （4）多 大 （5）盐 选择培养基
7．在10稀释度下取1ml稀释液涂布平板，求出3个平板上菌落数的平均值是63，那么每克样品中的菌落数是多少?
5
同步习题
一、选择题
1．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H4O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H4O、葡萄糖、琼脂、水 C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H4O、尿素、琼脂、水
D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H4O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 [答案] A
[解析] 根据题意可知，该培养基中必须要有尿素，故可排除B、D；而培养基中必须含有有机物作为碳源，又可排除C，故只有A符合题意。
2．某同学在10、10、10倍稀释液的平均菌落数为2760、295、和46，则菌落总数(个/mL)为( ) A．2.76×10 C．3.775×10 [答案] C
3．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应10培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有( )
①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照 A．①②③ C．①③④ [答案] A
4．请选出下列正确的步骤( )
B．②③④ D．①②③④
6
441
2
3
B．2.95×10 D．4.6×10
4
4
①土壤取样
②称取10g土壤放入盛有90g无菌水的锥形瓶中 ③吸取0.1mL进行平板涂布
1
2
3
[来源:学科网ZXXK]
5
6
7
④依次稀释10、10、10、10、10、10、10稀释度 A．①→②→③→④ C．①→④→②→③ [答案] D 二、非选择题
[来源:学,科,网Z,X,X,K]4
B．①→③→②→④ D．①→②→④→③
5．自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将他们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：
A．制备稀释倍数为10、10、10、10、10的系列稀释液
B．为了得到更加准确的结果，你选用________(稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接种样品 C．适宜温度下培养 结果分析：
(1)测定的大肠杆菌数，再对应稀释倍数的10的培养基，得到以下几种统计结果，正确可信的是
A．一个平板，统计的菌落数是23
B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24 C．三个平板，统计的菌落数是21、5和52，取平均值26 D．四个平板，统计的菌落数是21、30、24和25，取平均值25
(2)一同学在稀释倍数的10的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌落数是(0.2mL)________。
(3)用这种方法测定密度，实际活菌数量比测得的数量________，因为________________________。
(4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？
________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ [答案] 步骤B：稀释混合平板法。 结果分析： (1)D (2)1.17×10
8
6
6
2
3
4
5
6
(3)多，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落。 (4)不能；因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程。
一、选择题
1．关于土壤取样的叙述错误的是( ) A．土壤取样，应选取肥沃湿润的土壤 B．先铲去表层土3cm左右，再取样
[来源:学科网]
C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D．应在火焰旁称取土壤 [答案] C
[解析] 在土壤取样过程中，取样用的小铁铲和信封在使用前也要灭菌。
2．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找( )
A．土壤中 C．热泉中 [答案] C
[解析] 热泉中才可能有这种耐高温的酶。 3．需要在火焰旁操作的有( ) ①土壤取样 ②称取土壤 ③稀释土壤 ④涂布平板 ⑤微生物的培养 A．①②③④⑤ C．③④⑤ [答案] D
4．可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( ) A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹红Ⅲ试剂 D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂 [答案] A
[解析] 以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。 二、非选择题
5．探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。
实验原理 农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表土制成的稀泥浆，接种到无
B．②③④⑤ D．②③④ B．海水中 D．冷库中
氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。
材料用具 农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干、无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿，盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。
方法步骤
(1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在________操作。
(2)制备土壤稀释液。取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液1mL，转至9mL无菌水的大试管中，依次稀释到10倍稀释度。为实现无菌操作，试管口和移液管应在离火焰________cm处。
(3)涂布。按照10～10稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布。每个稀释度下，无氮培养基至少涂布________个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布________个平板。
(4)培养。放入恒温箱内，在适宜温度条件下培养3d～4d。一般每隔________小时统计一次，选
取
________
时
的
记
录
作
为
结
果
，
这
样
可
以
防
止
7
3
7
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。 (5)细菌的计数。当菌落数目稳定时，选取菌落数在________的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是________。(稀释度是10)
(6)预期结果。相等稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数________(填“多于”或“少于”)无
氮
培
养
基
上
的
数
目
。
理
[来源:学科网]5
由
是
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。 [答案] (1)酒精灯火焰旁 (2)1～2 (3)3 1
(4)24 菌落数目稳定 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 (5)30～300 5×10
(6)多于 无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的自生固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存
[解析] 考查微生物的分离及计数。要分离自生固氮菌，采用选择培养基分离的方法，缺乏氮源的培养基可用来分离自生固氮微生物，而其他微生物因缺乏氮源不能生长。实验步骤一般是：配制无氮培养基→灭菌→倒平板→系列稀释→涂布平板→培养→观察并计数。实验中要注意无菌操作和设计对照等。
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