5.1、乳房炎乳的检查
乳房炎分为慢性(隐形)乳房炎和急性(临床)乳房炎。传染源:隐形主要为金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等传染性细菌;临床型主要为大肠杆菌、芽孢杆菌、放线菌等环境性病菌。传播途径:隐形为从牛到牛,临床型为从环境到牛。病菌直接从乳头进入乳房。乳房炎乳中体细胞数、过氧化氢酶(多由体细胞崩坏而得)、氯化钠、乳清蛋白、PH等均增高,酸度、脂肪、乳糖、非脂乳固体等均减少。乳房炎乳可能因含有血液及凝固物,外观显粉红色。因离子浓度平衡打乱,酒精试验呈阳性反应,因含有过多的过氧化氢酶,自身具有很强的还原体系,故对甲烯兰和刃天青试验敏感。因含有较多的氯离子,氯糖比大于4.0,故对硝酸银试验敏感,呈黄色。因含有较多的体细胞,故对尿素呈阳性反应,故对下列检测项目的综合考虑可以正确判断:感官检验{蛋白不稳定,滋气味差}、滴定酸度{降低}、酒精试验{阳性}、尿素试验{阳性}、硝酸银试验{阳性}、甲烯兰或刃天青试验{敏感} 5.1.1、试剂配制:
Na2CO3溶液:60gNa2CO3.10H2O溶于100ml水中。 CaCL2溶液:40g无水氯化钙溶于300ml水中。g
以上两种溶液加温过滤,然后混在一起。加入等量的15%NaOH溶液,搅均匀后过滤,加入少量溴甲酚紫(有助于观察结果)。
5.1.2、检验方法:吸取乳样3ml ,置于白色平皿中,加入0.5ml上述试剂,混匀, 10秒钟后观察结果。 5.1.3结果判断 无沉淀及絮片 (-)阴性; 稍有沉淀发生 (+-)可疑; 肯定有沉淀 (+)阳性; 发生粘稠性团块并继之分为薄片 (++)强阳性; 有持续性的粘稠团块(凝胶) (+++)强阳性。
5.2陈旧奶的检验,原奶新鲜度检验
5.2.1煮沸试验
5.2.1.1检验方法:鲜奶5ml,加热煮沸1分钟,加等量中性水,观察凝固状态判定乳的酸度。 5.2.1.2结果判定: 凝固状态 有少量絮块 有较多凝块 全部为凝块 酸度 酸度约为27oT 酸度约为28oT 酸度约为30oT 酸度在25~26 oT即出现凝块,判定为不新鲜乳。 5.2.2酒精试验
5.2.2.1原理:本试验系乙醇的脱水作用,改变了酪蛋白的稳定性,陈旧乳即出现凝固现象,但因牛的生理失调,先天性酪蛋白失常亦可出现低酸度酒精凝固乳。 5.2.2.2检验方法:牛乳与75的乙醇等量混合(一般2ml),5秒钟内观察结果。本试验不适于检验羊奶,因羊奶蛋白质结构与牛奶不同,钙含量亦高于牛奶,因此在酸度牛奶检验正常时,羊奶则产生凝固。 5.2.2.3结果判定: 反应现象 不凝
程度 新鲜 表示方法 - 酸度 20 oT 5
极细凝固物 细凝固物 中型凝固物 大型凝固物 极大型凝固物 不太新鲜 不新鲜 不新鲜 不新鲜 很不新鲜 ± + ++ +++ ++++ 21~22 oT 22~24 oT 24~26 oT 26~28 oT 28~30 oT 5.2.3过氧化酶测定法
5.2.3.1操作方法:取牛乳4滴于凹玻片上,加过氧化氢2滴,待1~2分钟,观察有无气泡产生。新鲜乳2分钟不产生气泡。 5.2.3.2结果判定:
稍微不新鲜乳,1~2分钟产生气泡。
中等不新鲜乳,30~60秒开始产生气泡,面积中等。 极不新鲜乳,20~30秒开始产生气泡。布满全面积。
5.3生牛乳与熟牛乳的鉴别检验
5.3.1原理:生牛乳中有过氧化氢酶,能分解过氧化氢而与色素作用,牛乳加热后过氧化氢酶即被破坏。
5.3.2检测步骤:取5mL待测牛乳放入实干中,加入0.2mL 1%过氧化氢,摇匀,再加入0.2mL 2%的对苯二胺,摇匀。
5.3.3结果判定:生牛乳或加热至78℃以下者呈青蓝色,加热至79~80℃者,30s 后呈淡灰青色,加热至80℃以上者无颜色出现。
5.4硝酸盐的检出
5.4.1原理:在柠檬酸的酸性溶液中,NO3能被Zn还原为NO2,NO2与对氨基苯磺酸及盐酸奈乙二胺作用,能生成红色的偶氮化合物。
5.4.2试剂:锌粉(Zn) 0.6g
硫酸钡(BaSO4) 100g(110℃烘干1h) 柠檬酸 (C6H8C72 H2O) 75g 硫酸锰 (MnSO42 H2O) 10g 无水对氨基苯磺酸 (C6H4(NH2)(SO3H)) 4g 盐酸萘乙二胺 (C10H7NHCH2CH2NH22 2HCl) 2g
研细后将0.6g锌粉与100g硫酸钡充分混合,再与上述试剂全部混合制成固体试剂,密封保持干燥存放于棕色瓶中。 5.4.3仪器:试管,吸管。
5.4.4操作:取生鲜牛乳2mL于试管中,加上述固体试剂0.3g,振荡1.5min。
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5.4.5结果判定:若试管中呈红色,说明生鲜牛乳中NO3的含量超过正常值。
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5.5亚硝酸盐的检出
5.5.1原理:酒石酸溶液中,NO2能与对氨基苯磺酸重氮化再与α—萘胺偶合成偶氮化合物。 5.5.2试剂:酒石酸(C4H8O6) 89g 无水对氨基苯磺酸(C6H4(NH2)(SO3H)) 10g α—萘胺 1g
将上述三种试剂分别称好后小心在研钵中研细,充分混合,密封保持干燥存放于棕色瓶中,该固体试剂称为格里斯千试剂。 5.5.3仪器:试管,吸管。
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5.5.4操作:取生鲜牛乳3mL于试管中,加上述固体试剂0.3g,振荡(微加热)。
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5.5.5结果判定:若试管中呈桃红色,说明该生鲜牛乳中NO2的含量超过正常值。
5.6乳中血与脓的鉴别
5.6.1试剂:取少量的二胺基联苯,溶解在盛有2mL 95% 酒精的试管内,加入2mL 3%的过氧化氢溶液,摇匀后再加入3~4滴冰醋酸。
5.6.2检验方法:在上述配制的试液中,加入4~5mL待测牛乳。 5.6.3结果判定:如有血与脓存在时,20~30s 后液体呈现深蓝色。
6.0掺假检验 6.1掺水的检验
6.1.1、乳清比重测定法
6.1.1.1原理:正常牛乳中,乳糖及矿物质含量比较稳定,因此可以用乳清比重来确定牛乳可能掺水、米汤、豆浆、豆饼水和稀薄动物胶等。
6.1.1.2器材:5ml吸管、250ml烧杯4~5个、500ml玻璃漏斗、水浴锅或恒温箱、乳比重计、定性滤纸、200ml三角杯。
6.1.1.3试剂:20%醋酸(取冰醋酸20ml,加100ml蒸馏水)
6.1.1.4方法:取乳样200ml于250ml烧杯中,加入20%醋酸4ml,于40℃水浴下放置,使蛋白质凝固后过滤,最后转入量桶,按牛乳比重测定方法测定。
结果判定:正常牛乳乳清比重为1.027~1.030,如果低于1.027,至少掺5%的水或相应的液体。
6.1.2相对密度法
6.1.2.1原理:正常牛乳在20℃时,相对密度在1.029~1.033之间,掺水后的牛乳,其相对密度将低于此值,(每加10%的水可使比重降低0.003)。
6.1.2.2方法:将混合均匀的待测样品小心的倒入200ml或250ml量筒中,不要产生气泡,然后小心的放入比重计,注意不可使比重计的重锤与筒壁相碰撞。静置2~3分钟,读取相对密度值即可。
6.1.2.3脱脂牛乳的相对密度会升高,可采用乳清相对密度法测定
6.2掺碱的检验
6.2.1目的:为掩盖牛乳的酸败现象,降低牛乳的酸度,防止牛乳因酸败而发生凝结,可能向已酸败的牛乳中加入碳酸钠(苏打)或碳酸氢钠(小苏打)。加碱后的牛乳不仅滋味不佳,而且细菌易于生长繁殖,对人体健康有害。因此,检验牛乳中掺碱是很重要的。 6.2.2检验方法
6.2.2.1生鲜牛乳中如掺有碱性物质,可使指示剂溴麝香草酚蓝变蓝色。溴麝香草酚蓝(亦称为溴百里香酚蓝)是一种酸碱指示剂,PH值变化范围在6.0~7.6。颜色由黄变蓝,加碱的生鲜牛乳氢离子浓度发生了变化,因而使溴麝香草酚蓝显示出与正常牛乳不同的颜色,同时根据颜色的不同,还可判断其加碱量的多少。
6.2.2.1.1试剂:0.04%溴麝香草酚蓝 [ C27H28O5Br2S ] 乙醇(95%)溶液:称取0.04g溴麝香草酚蓝溶于少量95%乙醇溶液,然后将溶液转移到100mL容量瓶中,再用95%乙醇溶液稀释至刻度。
6.2.2.1.2仪器:试管、吸管、洗瓶(内装蒸馏水)。
6.2.2.1.3操作:先用洗瓶冲洗试管,然后取生鲜牛乳样5mL于试管中,将试管保持倾斜位
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置,沿管壁小心向试管中加入0.04%溴麝香草酚蓝乙醇溶液5滴,而后将试管轻轻斜转2—3回,使其更好地相互接触,但且勿使阴天相混合,然后把试管垂直放置,2min后根据环层指示剂的颜色特征判定检验结果。同时用未掺碱的正常生鲜牛乳作空白对照。
6.2.2.1.4掺碱量的判定:根据环层颜色的变化判定结果如下表,对照试管中指示剂无颜色变化,生鲜牛乳中含碱量折算成NaHCO3的量。见下表: 生鲜牛乳中含NaHCO3的浓度 无 0.03 0.05 0.1 0.3 单 位 % % % % % 环层颜色 特 征 黄 黄绿 淡绿 绿 深绿 生鲜牛乳中含NaHCO3的浓度 0.5 0.7 1.0 1.5 单 位 % % % % 环层颜色 特 征 青绿 淡青 青 深青 6.2.2.1.5注:掺水的生牛乳、掺石灰水、洗衣粉以及乳房炎牛乳均可呈现出黄绿色至深青色的颜色变化。
6.2.2.2现场检验可用玫瑰红法。
6.2.2.2.1操作方法:取待检样品5mL,置于试管中,加入5mL0.5g/L 玫瑰红乙醇溶液,混匀,观察颜色。
6.2.2.2.2结果判定:未加碱者呈黄色,加碱呈红色,并且红色深浅与加碱量成正比。
6.3牛乳中掺豆浆或豆饼水的鉴别
6.3.1皂素检测法
6.3.1.1原理:豆浆中含有皂素,皂素可溶于热水或热酒精,并可与氢氧化钠反应生成黄色化合物。
6.3.1.2操作步骤:取样品20ml,放入三角瓶中,加入(1:1)乙醇-乙醚混合液3ml及25%氢氧化钠溶液5ml,摇匀静置5min后观察。
6.3.1.3结果判定:混合液成黄色,说明样品中掺有豆浆,如呈暗白色则为正常。 6.3.1.4采用上述方法,需同时作空白对照试验。本方法灵敏度不高,当豆浆掺入量大于10%才呈阳性反应。 6.3.2铁含量测定法
6.3.2.1原理:正常的生鲜牛乳中含铁量<2mg/kg,而大豆中含铁量>100mg/kg,若生鲜牛乳中掺有豆浆或豆饼水,则乳中含铁量显著增加,所以可以用铁定性法间接测出乳中是否含有豆浆或豆饼水,Fe3+能被氢氧化亚锡还原为Fe2+,Fe2+与邻二氮菲在PH2~9的溶液中,能反应生成水溶性的橙红色络合物〔(C12H8N2)3Fe〕2+。 6.3.2.2仪器:183200mm大试管,吸管5ml、10ml 6.3.2.3试剂:氯化亚锡(SnCl222H2O)、邻二氮菲(C12H8N2)溶液{取1.0g邻二氮菲溶于100ml乙醇中,加水稀释至100ml。
6.3.2.4操作:取生鲜牛乳10ml于大试管中,加入100mg的SnCl222H2O,充分振摇,加2ml邻二氮菲溶液,混匀观察。 6.3.2.5结果判定:掺豆浆或豆饼水的牛乳呈粉红色颜色随掺入量的增加而加深。正常生鲜牛乳试管中无明显的颜色变化。该法检出限为5%。 6.3.3感官检验法:
6.3.3.1操作方法:取一玻璃杯牛奶,用棒搅匀,静置片刻,然后倒入另一杯子内。如果原来的玻璃杯底部有沉淀物和细渣出现,可视为有豆浆和淀粉掺入。另外,牛奶中掺入豆浆时,
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