酶工程实验报告三( 纤维素酶最适反应pH值的测定)

本科学生实验报告

学号 104120440 姓 名 孙 永 升 学院 生命科学学院 专业、班级 10生物技术 实验课程名称 酶 工 程 < 实 验 > 教师及职称 李 俊 俊 < 讲 师 >

开课学期 2012 至 2013 学年 第二学期 填报时间 2013 年 4 月 24 日

云南师范大学教务处编印

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实验名称 实验方式 小组成员 XX 实验三 纤维素酶最适反应pH值的测定 小组合作 XX XX XX 1、 实验目的 掌握酶最适pH值的测定方法及原理。 2、 实验仪器、试剂和溶液： A 2 仪器： 紫外分光光度计、比色皿（3个）、恒温水浴锅(4台)、试管架（1个）、1ml移液管（1根）、10ml移液管（1根）、玻璃棒（1根）、1000ml烧杯（1个）、500ml烧杯（2个）、1000ml容量瓶（1个)、洗耳球（1个）、标签（若干）等。 B 2 试剂和溶液 ① DNS试剂(CMCA-DNS )：称取 3,5 一二硝基水杨酸(10士0.1) g，置于约600mL水中，逐渐加入氢氧化钠log，在50℃水浴中(磁力)搅拌溶解，再依次加入酒石酸甲钠200 g、苯酚(重蒸)2g和无水亚硫酸钠5g，待全部溶解并澄清后，冷却至室温，用水定容至1000mL，过滤。贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置7d后使用。 ② 乙酸-乙酸钠缓冲液，0.01mol/L ③ CMC-Na溶液（底物溶液） ④ 纤维素酶液(pH4 .8 和pH6 .0)。 3、实验原理及实验流程或装置示意图： A 3原理: pH值对酶反应速度有显著影响。每一种酶都有一个特定的最适反应pH值，在

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此pH值下酶反应速度最快，而在此pH值两侧酶反应速度都会受到影响而放缓。因为酶蛋白是两性电解质，具有许多可解离基团，在不同的酸碱环境中这些基团的解离状态不同，所带电荷不同，而他们的解离状态对保持酶的结构，底物与酶的结合能力以及催化能力都有重要作用。表现酶最大活性的pH值即为该酶的最适pH值。不同的酶其最适pH值不同。 pH与酶活性关系的测定是在其它条件（如底物浓度、酶浓度、反应温度等）恒定的最适情况下，选用一系列变化的pH环境中进行初速度测定，其图形一般为钟形曲线。 B 3 实验流程: 酶液的稀释（不同pH所用酶液用对应pH缓冲液稀释） ↓ 不同pH下（55℃）水浴30min ↓ 沸水浴10min ↓ 迅速冷却至室温,用水定容至25ml ↓ 540nm处测吸光度（OD540） ↓ 绘制pH -酶活力曲线求出纤维素酶最适pH 4、实验方法步骤、操作流程及注意事项： A 4 、实验方法 1、本实验在pH值3.0至10.0之间选择不同pH值环境下测定酶活力，以找出 纤维素酶在此条件下的最适pH值。

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