实验讨论:
1. 实验过程中怎样对过氧化氢酶进行纯化?
因为过氧化氢酶溶于水,几乎不溶于乙醇,氯仿乙醚等有机溶剂,在PH为4.8是不宜变性且稳定存在最适温度为38摄氏度,最适ph值为7.8。所以我们可以根据它的这些特性,在实验过程中用乙醇,氯仿,醋酸缓冲液,ph为7.8的磷酸缓冲液等化学试剂,并配合盐析,离心等方法进行纯化。
2. 试验中如何减少过氧化氢酶的损失?
(1) 在透析袋浑浊溶液转移时,多次用磷酸缓冲液冲洗。 (2) 实验时要保证冰浴环境,减少过氧化氢酶的失活。
(3) 实验过程中用乙醇和氯仿有机溶剂除去能影响过氧化氢酶活
性的杂质,从而保护过氧化氢酶。
(4) 样品溶液中不能长时间存有有机试剂,以防其破环过氧化氢酶
的活性。
3.实验过程中影响制备效率的因素有哪些?
(1)样品转移时最容易造成样品的损失,尤其在透析袋浑浊样品转移时损失最大。
(2)分离样品和杂质时,造成样品损失,如离心。 (3)在匀浆,透析,盐析时部分样品失活造成样品损失。 4.为什么选择小鼠肝脏作为过氧化氢酶的提取原料? 因为肝脏中过氧化氢酶含量较其他组织多,也容易操作。 5.匀浆缓冲液有什么作用?
使过氧化氢酶等物质充分的溶解其中,提高实验的效率。 6.盐析时加入硫酸钠溶液后为什么会产生沉淀?
硫酸钠破坏了蛋白质的水化膜和电荷平衡,是蛋白质沉淀下来。 7.为什么要在冰浴中进行盐析的操作? (1)保护过氧化氢酶的活性 (2)使过氧化氢酶的溶解度降低。
8.电泳时,电泳槽中两板为什么要一长一短,电泳液为什么要没过短板?
因为电泳槽内外不相通,只有让两板一长一短,让电泳液没过短板才能让内外液通过凝胶联通,起到电泳的效果。
9.层析时为什么要保证层析柱上面为平面,并且在加液体时要延内径旋转加入?
因为只有保证层析柱上为平面,才能使各处的蛋白质处于相同的起跑点,最后到达一处的蛋白质为同种蛋白质,加液时要慢并且要旋转加液也是为了防止快速直接加液时,水流冲击凝胶柱,造成凝胶住上面凹凸不平。影响实验结果。
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