课时跟踪检测（一）大肠杆菌的培养和分离
1．下列有关微生物培养条件的叙述，错误的是()
A．分离微生物常用固体培养基，扩大培养常用液体培养基
B．“细菌喜荤，霉菌喜素”，培养基中成分的含量和配比因培养物而异 C．培养基的灭菌均采用高压蒸汽法 D．制作固体培养基时常常加入xx
解析：选C培养基的灭菌通常是采用高压蒸汽法，但因培养基的成分而异。如培养基中有葡萄糖，高压蒸汽条件下会导致葡萄糖分解碳化，而采用500 g/cm压力灭菌30 min。
2．获得纯净培养物的最关键环节是()
A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B．接种纯种细菌 C．适宜环境条件下培养 D．防止外来杂菌的入侵
解析：选D纯净培养物是单一、纯种菌的菌落。因此，确保无其他杂菌的入侵是关键。
3．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒。下述有关接种金黄色葡萄球菌的实验叙述错误的是()
A．将灼烧的接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位 B．取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌 C．对接种环进行灼烧处理 D．接种后还要将试管口灭菌加塞
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解析：选A接种环伸入试管后应先接触未长菌的部位，待接种环冷却后再接触长菌部位。
4．下列划线分离的图解中，正确的是()2
解析：选C划线分离的划线有许多要求。A的划线方法不对，而B错在划线2的起点，D项错在4与1交叉了。
5．要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养、并利用纯化技术得到单菌落。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题：
(1)对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养，一般用LB培养基，在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是____________________，为调节渗透压，要加入一定量的__________。为进行大肠杆菌的分离，还要加入琼脂配制成固体培养基，并进行倒平板的操作。
(2)获得纯净微生物培养物的关键是____________________，为此，必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培养器皿和培养基一般采用________法灭菌，接种环采用灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外，还必须_______________________________________以防止空气中的杂菌污染。
(3)大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基，接种后将培养基置于37 ℃摇床振荡条件下培养12小时。菌种的分离一般在固体培养基上采用____________法，并将培养皿以______状态放置于适宜温度的恒温箱中，培养12～24小时后，____________________，接种于固体斜面培养基上，37 ℃培养24小时后，得到的纯化菌种在________条件下保存。
解析：(1)LB培养基的主要成分有蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水、琼脂，其中蛋白胨和酵母提取物为微生物提供碳源、氮源和能源，氯化钠可以调节培养基的渗透压，琼脂作为凝固剂。
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(2)微生物纯培养的关键是防止外来杂菌的污染，因此操作过程中要严格灭菌，培养器皿和培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌，而接种时要在酒精灯火焰旁进行。(3)大肠杆菌菌种分离采用划线分离法，接种后将培养皿置于恒温箱中倒置培养，以防培养过程中被污染；培养后菌种的保藏方法是：用接种环将单菌落挑出，接种于斜面培养基上，37 ℃培养24小时后置于4 ℃条件下保存。
答案：(1)蛋白胨和酵母提取物氯化钠
(2)防止外来杂菌的侵入高压蒸汽灭菌保证操作过程在酒精灯火焰旁进行(3)划线分离倒置将单菌落用接种环取出4 ℃
6．大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有10个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题：
(1)测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法。该方法首先配制LB______培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至60 ℃，在__________旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一定倍数的稀释，取0.1 mL奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用______________涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中______数目；该数据比实际数值要______(填“高”或“低”)，原因是_________________________________。实验完成后需要对培养基进行________处理，然后才能倒掉。
(2)若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配制LB________培养基，灭菌后，将________在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培养________h即可。
解析：(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精灯火焰旁倒平板。
在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因此观察到的菌落数可
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能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。(2)对微生物进行扩大培养，通常使用LB液体培养9
基。一般用接种环转移带菌的培养物。接种时，先将接种环在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取带菌的培养物，放到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种培养12 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。
答案：(1)固体酒精灯火焰玻璃刮刀(涂布棒)菌落低培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落灭菌
(2)液体接种环12
7．据所学知识，回答下列问题：
(1)菌落是由微生物在适宜_______培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见、有一定形态结构的子细胞的群体。适宜的培养基，除了含微生物所需的营养物质以外，还要考虑_______、_______等。
(2)______________、______________这两种分离方法都能使培养基的表面形成由__________形成的单个菌落，其中______________还可用于对菌液中的菌体进行计数。
解析：微生物在液体培养基中能较快繁殖，但不能形成子细胞的集群。当固体培养基表面接种的菌密度足够低时，菌落就是从单个菌体分裂形成的。
答案：(1)固体酸碱度渗透压(2)划线分离法涂布分离法单个菌体涂布分离法
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