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《生物化学》教案

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CH3COCH3 + 3NaOI CHI3 + CH3COONa + 2NaOH

碘仿

剩余的碘,可用标准硫代硫酸钠溶液滴定。

NaOI + NaI + 2HCl I2 + 2NaCl + H2O

I2 + 2Na2S2O3 Na2S4O6 + 2NaI

根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差,可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。

实验八 菜花(花椰菜)中核酸的分离和鉴定

一、实验目的:

初步掌握从菜花中分离核酸的方法,和RNA、DNA的定性检定。 二、实验原理

用冰冷的稀三氯乙酸或稀高氯酸溶液在低温下抽提菜花匀浆,以除去酸溶性小分子物质,再用有机溶剂,如乙醇、乙醚等抽提,去掉脂溶性的磷脂等物质,最后

用浓盐溶液(10% 氯化钠溶液)和0.5mol/L 高氯酸(70℃)分别提取 DNA 和 RNA,再进行定性检定。

由于核糖和脱氧核糖有特殊的颜色反应,经显色后所呈现的颜色深浅在一定范围内和样品中所含的核糖和脱氧核糖的量成正比,因此可用此法来定性、定量的测定核酸。

1. 核糖的测定:

测定核糖的常用方法是苔黑酚法。当含有核糖的 RNA与浓盐酸及3,5 - 二羟甲苯在沸水浴中加热10~20分钟后,有绿色物产生,这是因为 RNA 脱嘌呤后的核糖与酸作用生成糠醛,后者再与3,5 - 二羟甲苯作用产生绿色物质。

DNA、蛋白质和粘多糖等物质对测定有干扰作用。

2. 脱氧核糖的测定:

测定脱氧核糖的常用方法是二苯胺法。含有脱氧核糖的DNA在酸性条件下和二苯胺在沸水浴中共热10分钟后,产生蓝色。这是因为DNA嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-6-酮基戊醛,它再和二苯胺作用产生蓝色物质。

100℃

DNA + 二苯胺试剂 蓝色物

此法易受多种糖类及衍生物和蛋白质的干扰。

上述二种定糖的方法准确性较差,但快速、简便,能鉴别DNA与RNA,是鉴定核酸、核苷酸的常用方法。

实验九 发酵过程中无机磷的利用

一、实验目的:

掌握定磷法的原理和操作技术。了解发酵过程中无机磷的作用。 二、实验原理

酵母能使蔗糖和葡萄糖发酵产生乙醇和二氧化碳。此发酵作用和酵解作用的中间步骤基本相同。在酵母体内蔗糖先经蔗糖酶水解为葡萄糖和果糖,葡萄糖和果糖在发酵过程中再经磷酸化作用和其他反应生成各种磷酸脂。

本实验利用无机磷与钼酸形成的磷钼酸络合物被还原剂α-1,2,4-氨基萘酚磺酸钠还原成钼蓝的原理来测定发酵前后混合物中无机磷的含量,用以观察发酵过程中无机磷的消耗。

实验十 氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法 一、 实验目的

了解氨基酸滤纸层析的原理及操作方法。 二、实验原理

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。

层析溶剂是有机溶剂和水组成。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的

原点到层析点中心的距离

Rf = 溶剂前沿

原点到溶剂前沿的距离 o 层析点

在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。 Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、 层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。 本实验利用纸层析法分离氨基酸。

× 原点

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